BHI agarový základ, příprava a použití

650
Egbert Haynes

The BHI agar Brain Heart Infusion Agar je pevné výživné kultivační médium. Ve španělštině to označujeme jako agar infuze mozkového srdce. Jedná se o neselektivní kultivační médium, což znamená, že se mohou vyvinout všechny typy grampozitivních a gramnegativních bakterií, stejně jako některé kvasinky a vláknité houby..

Skládá se z infuze hovězího mozku a srdce, peptického hydrolyzátu ze zvířecích tkání, hydrolyzátu pankreatu z kaseinu, chloridu sodného, ​​glukózy, fosforečnanu sodného a agaru..

BHI desky. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Je třeba poznamenat, že BHI agar je jedním z nejčastěji používaných kultivačních médií v bakteriologických laboratořích. Může být použit bez doplňků jako primární kultura, subkultura kolonií získaných na jiných selektivních médiích nebo pro udržování kmenů v laboratoři.

Na druhou stranu je to ideální médium pro použití jako základ při přípravě obohaceného média, jako je krevní agar a čokoládový agar. Oba jsou ideální pro izolaci náročných mikroorganismů z nutričního hlediska. Je však třeba poznamenat, že jelikož obsahuje glukózu, není vhodný ke sledování hemolytických vzorců..

Podobně lze agar BHI použít k přípravě speciálních médií pro izolaci obtížně rostoucích patogenních mikroorganismů v běžných médiích, včetně: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae a Histoplasma capsulatum.

S antibiotickou přísadou se BHI agar stává selektivním médiem pro izolaci hub.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Klíny
    • 2.2 Desky
    • 2.3 Příprava krevního agaru
  • 3 použití
    • 3.1 Použití bez doplňků
    • 3.2 Jako základní agar pro přípravu jiných médií
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Reference

Základ

Jedná se o výživné kultivační médium pro izolaci středně náročných mikroorganismů a jeho obohacení lze zvýšit přidáním krve a dalších doplňků výživy..

Je to neselektivní kultivační médium, proto umožňuje růst většiny grampozitivních a gramnegativních bakterií i některých hub. Může se však stát selektivní přidáním antibiotik..

Médium obsahuje infuzi hovězího mozku a srdce, peptický hydrolyzát živočišných tkání a hydrolyzát pankreatického kaseinu; všechny tyto sloučeniny působí jako zdroje vitamínů, aminokyselin, dusíku a uhlíku.

Glukóza je sacharid, který dodává energii mikroorganismům, jakmile je fermentují. Mezitím chlorid sodný a fosforečnan sodný udržují osmotickou rovnováhu a poskytují pH blízké neutralitě. Nakonec agar dodá médiu pevnou konzistenci.

Příprava

Naváží se 52 gramů dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se přivede do zdroje tepla až do varu, přičemž se během procesu rozpouštění často míchá..

BHI agarové desky nebo klíny lze připravit bez přísad.

Klíny

K přípravě klínů podávejte přípravek, dokud není naplněna polovina každé zkumavky, zakryjte a sterilizujte v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut, po opuštění položte na základnu, dokud neztuhnou. Později skladujte až do použití v chladničce.

Klíny BHI pro bakterioteca. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Talíře

Rozpuštěná směs se autoklávuje při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut, načež se nechá vychladnout na 50 ° C a 20 ml média se podává ve sterilních Petriho miskách. Nechají se ztuhnout, převracejí se a až do použití se skladují v chladničce. Před naočkováním nechte destičky dosáhnout pokojové teploty.

Hodnota pH média musí zůstat na 7,4 ± 0,2.

Nepřipravené médium je béžové barvy a připravené je světle jantarové barvy.

Příprava krevního agaru

Po sterilizaci média ochlaďte na teplotu přibližně 45 až 50 ° C, poté přidejte krev (50 ml), jemně promíchejte k homogenizaci a asepticky podejte 20 ml do každé Petriho misky. Pokud se na talíři vytvoří bubliny, musí být přes tyto bubliny rychle přenesen lehčí plamen.

Podobně lze speciální média připravit přidáním odpovídajících přísad, když směs dosáhne teploty 45 až 50 ° C..

Uprostřed je třešňově červená.

Aplikace

Používejte bez doplňků

BHI agar bez přísad je vhodný jako primární kultura a pro setí čistých kmenů nízko nebo středně náročných mikroorganismů pro jejich následnou identifikaci..

Jelikož se jedná o světle zbarvené médium, je ideální pro pozorování pigmentů a protože neobsahuje interferující látky, lze na něm provádět některé biochemické testy, jako je oxidáza a kataláza, nebo lze provést další biochemické testy z kolonií. z tohoto agaru.

Podobně jsou agarové klíny BHI široce používány pro udržování kmenů po určitou dobu v laboratoři (bakterioteca).

Destičky nebo klíny s bakteriálními kmeny se inkubují 24 až 48 hodin při 37 ° C. Zatímco u hub bude teplota a inkubační doba záviset na druhu hledané houby..

Jako základní agar pro přípravu jiných médií

S touto základnou můžete připravit obohacená a selektivní média.

Obohacený

Jeho hlavní funkcí je sloužit jako základ při přípravě krevního agaru pro rutinní použití v mikrobiologických laboratořích. Zejména báze BHI přispívá k izolaci kmenů Streptococcus sp. Má však tu nevýhodu, že není vhodný pro pozorování hemolytických vzorců, protože obsahuje glukózu..

Používá se také k přípravě agaru z králičí nebo koňské krve k izolaci Haemophilus sp. Pro lepší výsledky lze přidat doplněk obohacení (IsoVitaleX).

Pokud vzorky pocházejí z dýchacích cest na agar, lze přidat bacitracin, který inhibuje doprovodnou flóru a zvyšuje pravděpodobnost zotavení kmenů Haemophilus sp.

Na druhou stranu lze izolovat krevní agar (jehněčí nebo lidský) s cystin teluritem Corynebacterium diphtheriae. Podobně je užitečné připravit agar z králičí krve s přídavkem cystinu a glukózy pro izolaci Francisella tularensis.

Destičky s krevním agarem se vysejí vyčerpáním a inkubují se při 35-37 ° C po dobu 24-48 hodin v mikroaerofilitě (5-10% COdva).

Selektivní

Toto médium s přídavkem antibiotik může nahradit Sabouraudův agar pro izolaci hub..

Kombinace BHI agaru s chloramfenikolem - gentamicinem nebo penicilinem - streptomycinem a koňskou krví je ideální pro izolaci Histoplasma capsulatum.

V závislosti na mikroorganismu, který má být izolován, se doporučuje inkubace při 35-37 ° C nebo při pokojové teplotě v aerobióze. Někdy je nutná inkubace v obou teplotních rozsazích, k tomu jsou použity 2 destičky..

Některé houby jako Trichophyton mentagrophytes by měly být inkubovány při pokojové teplotě po dobu až 7 dnů.

QA

Z každé připravené šarže se doporučuje inkubovat 1 destičku nebo klín 24 hodin při 37 ° C a ověřit, že nedochází k růstu; zvláště důležité při přípravě krevního agaru, protože se jedná o snadno kontaminované médium.

Na druhou stranu lze kvalitu média vyhodnotit naočkováním známých nebo certifikovaných standardních kmenů a sledováním jejich vývoje..

V tomto smyslu vyhodnotit BHI agar bez přísad, kmenů Escherichia coli ATCC 25922, Zlatý stafylokok ATCC 25923 nebo Candida albicans ATCC 10231. Inkubujte při teplotě 37 ° C v aerobióze po dobu 24 až 48 hodin. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

K vyhodnocení krevních agarových destiček, kmenů  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 nebo Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriální kmeny se inkubují při 37 ° C v mikroaerofilitě po dobu 24 hodin, zatímco houba se inkubuje při teplotě místnosti ve vlhké komoře po dobu až 7 dnů. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

Reference

  1. Britannia Laboratories. Agar s infuzí mozku. 2015. Dostupné na: britanialab.com.
  2. BD Laboratories. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Dostupné na: bd.com.
  3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, S.A. Agar s infuzí mozku. 2009.
  4. Laboratoř Neogen. Agar s infuzí mozku. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Krevní agar: základy, použití a příprava. 2018. Dostupné na: lifeder.com.
  6. Přispěvatelé z Wikipedie. Infuze mozkového srdce. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. září 2018, 03:58 UTC. K dispozici na: wikipedia.org. Zpřístupněno 2. března 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře