Endo agarový základ, příprava a použití

4319
David Holt

The endo agar nebo Endo médium je pevné, diferenciální kultivační médium s určitým stupněm selektivity. Původní vzorec vytvořil Endo v roce 1904, aby odlišil fermentaci laktózy od nefermentujících bakterií. Zpočátku to bylo navrženo tak, aby izolovat Salmonella typhi, ale později se cíl média obrátil k hledání koliformních bakterií.

Princip endo agaru zůstal, ale jeho formulace prošla v průběhu let nesčetnými změnami. V současné době se médium skládá z peptického trávení živočišné tkáně, laktózy, hydrogenfosforečnanu draselného, ​​siřičitanu sodného, ​​bazického fuchsinu a agaru..

A: Virgin Endo Agar B: Naočkovaný endo agar, uprostřed agaru si můžete všimnout kovového lesku kmene E. coli. Zdroj: A: Strolch1983 [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/)] / B: LenkaM [CC BY-SA 1.0 (https://creativecommons.org/licenses /by-sa/1.0)]

Hlavní použití média bylo spojeno s izolací a diferenciací gramnegativních bacilů patřících do rodiny Enterobacteriaceae a do dalších blízkých rodin..

Po dlouhou dobu se používalo při detekci koliformních bakterií ve vzorcích vody, mléčných výrobků a potravin, ale dnes bylo použití tohoto média nahrazeno jinými s podobnými funkcemi. Některé mikrobiologické laboratoře však tento agar používají k izolaci Enterobacteriaceae ze vzorků klinického původu..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Endo agar
    • Varianta agaru 2,2 m-endo
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Endo agar obsahuje peptony, které slouží jako zdroj aminokyselin, dusíku, uhlíku a energie, nezbytné pro růst nenáročných mikroorganismů..

Na druhé straně mírně selektivní charakter agaru zajišťuje přidání siřičitanu sodného a bazického fuchsinu; obě složky částečně nebo úplně inhibují růst většiny grampozitivních bakterií.

Diferenciální charakter je dán přítomností fermentovatelného sacharidu, kterým je v tomto případě laktóza a bazický fuchsin, který slouží také jako indikátor pH..

Gramnegativní bakterie, které rostou na tomto agaru a jsou schopné fermentovat laktózu, vytvoří silné růžové kolonie; být patognomický pro Escherichia coli tvorba tmavě červených kolonií s duhově nazelenalým kovovým leskem. To je způsobeno vysokou produkcí kyselin z fermentace sacharidů..

Je třeba poznamenat, že médium kolem kolonií má také silně růžovou barvu. Zatímco nelaktózové fermentující gramnegativní tyčinky tvoří světle narůžovělé kolonie podobné středním nebo bezbarvým.

Hydrogenfosforečnan draselný vyrovnává pH média a agar je složkou, která zajišťuje pevnou konzistenci.

Příprava

Endo agar

Naváží se 41,5 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se za stálého míchání zahřívá, dokud se médium úplně nerozpustí. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C a tlaku 15 lb po dobu 15 minut.

Při vyjímání z autoklávu nechte vychladnout na teplotu přibližně 45-50 ° C, před podáváním směs protřepejte, aby se zhomogenizovala. Nalijte 20 ml do sterilních Petriho misek.

Před uložením do chladničky nechte destičky ztuhnout, převraťte je a uložte na plaketu nebo zabalte do tmavého papíru. Je velmi důležité chránit připravené médium před přímým světlem. Doporučeným postupem je připravit přesné množství, které budete potřebovat.

Pokud jsou desky uchovávány v chladničce, měly by se před použitím nechat zahřát..

PH média by mělo být mezi 7,2 až 7,6 a barva připraveného média je světle růžová..

Varianta agaru M-endo

Existuje další verze agaru Endo (m-Endo), která následuje vzorec McCarthy, Delaney a Grasso, který obsahuje více sloučenin a liší se formou přípravy.

Tato varianta obsahuje: laktózu, tryptózu, enzymatické trávení kaseinu, enzymatické trávení živočišné tkáně, chlorid sodný, hydrogenfosforečnan draselný, siřičitan sodný, kvasnicový extrakt, jednosytný fosforečnan draselný, základní fuchsin, deoxycholát sodný, sodná sůl laurylsulfátu a agar.

V tomto případě se 51 g dehydratovaného média zváží a suspenduje v 1 litru destilované vody obsahující 20 ml ethanolu..

Za stálého míchání mírně zahřejte, dokud se médium úplně nerozpustí. Neměl by být přehříván a neměl by být autoklávován. Jakmile je směs homogenní, naservírujte ji do sterilních Petriho misek a nechte ztuhnout..

Použití

V některých zemích se stále používá k počítání celkových a fekálních koliformních bakterií ve vzorcích potravin a vody, zejména při hledání přítomnosti Escherichia coli jako hlavní indikátor fekální kontaminace.

Agar M-Endo je doporučován Americkou asociací pro veřejné zdraví (APHA) pro monitorování a kontrolu dezinfekčních a čisticích programů odpadních vod a také pro hodnocení kvality pitné vody..

Nejčastěji používanou metodou je membránová filtrace po obohacení vzorku o Laurylsulfátový bujón po dobu 2 až 4 hodin..

Může být také použit jako náhrada za EMB agar v mikrobiologické analýze potravin a vody technikou nejpravděpodobnějšího počtu (MPN), konkrétně v úplné potvrzovací fázi k potvrzení přítomnosti E-coli ze zakalených EC vývarů.

QA

Pro vyhodnocení kvality připravené dávky agaru Endo se vysejí známé nebo certifikované kontrolní kmeny..

Mezi kmeny, které lze pro tento účel použít, patří: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 a Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Kmeny se vysadí vyčerpáním a inkubují se 24 hodin při 37 ° C v aerobióze.

Očekávané výsledky jsou:

  • V následujících situacích Escherichia coli: silné červené kolonie s kovovým leskem.
  • V následujících situacích E. cloacae Y K. pneumoniae kolonie by měly být růžové mukoidní.
  • V případě S.. typhimurium, S. flexneri a P. mirabilis kolonie jsou obvykle světle růžové nebo bezbarvé.
  • Konečně, E. faecalis očekává se, že bude částečně inhibován, proto musí být jeho růst špatný s velmi malými, silně růžovými koloniemi.

Omezení

-Endo médium má nízkou selektivní sílu, proto je možné, že některé grampozitivní mikroorganismy, jako je Staphylococcus, Enterococcus a dokonce i kvasinky, mohou růst.

-V tomto médiu se mohou vyvinout další bacily, které nepatří do čeledi Enterobacteriaceae, jako například Pseudomonas sp Y Aeromonas sp. Charakteristikou těchto kmenů jsou bezbarvé nepravidelné kolonie.

-Toto připravené médium je velmi citlivé na světlo, proto jeho dlouhodobé vystavení zhoršuje systém indikátorů a nevratně poškozuje médium..

-Složky média jsou považovány za karcinogenní, proto je třeba se vyhnout přímému kontaktu.

-Dehydratované médium je velmi hygroskopické a musí být uchováváno v původním obalu při pokojové teplotě, těsně uzavřeno a v suchém prostředí..

Reference

  1. BD Laboratories. Endo agar. 2013. Dostupné na: bd.com
  2. Neogen Laboratories. M Endo Agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  3. „Agar Endo.“ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. září 2017, 08:27 UTC. 28. února 2019, 22:55. Dostupné na: en.wikipedia.
  4. Laboratoř MercK. Endo agar. 2019. Dostupné na: merckmillipore.com
  5. Laboratoře technických listů. M-Endo Agar LES. 2015. Dostupné na: liofilchem.net

Zatím žádné komentáře