TCBS agar Odůvodnění, příprava a použití

3818
Egbert Haynes

The TCBS agar je vysoce selektivní a diferenciální pevné kultivační médium, které se používá k izolaci a kultivaci bakterií rodu Vibrio, zejména Vibrio cholerae, V. vulnificus Y V. parahaemolyticus jako hlavní patogeny tohoto rodu.

Zkratka TCBS znamená Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Tento agar je také známý jako selektivní médium pro Vibria. Původní vzorec vytvořil Nakanishi a později jej upravil Kobayashi.

Komerční TCBS médium a TCBS agarová deska naočkovaná Vibrio cholerae. Zdroj: fotografie 1: pořízeno autorem MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Indie [Public domain]

Skládá se z kvasnicového extraktu, masového peptonu, tripteinu, citrátu sodného, ​​thiosíranu sodného, ​​žlučové žluči, sacharózy, chloridu sodného, ​​citrátu železitého, bromthymolové modři, thymolové modři a agaru..

Toto složení umožňuje adekvátní vývoj druhů Vibrio ze vzorků vody, potravy a výkalů; až na Vibrio hollisae, který v tomto prostředí neroste. Kromě toho je médium TCBS schopné inhibovat růst dalších doprovodných bakterií, zejména koliformních bakterií..

Vzhledem k vážným gastrointestinálním a extraintestinálním problémům, které produkují některé druhy rodu Vibrio, je jeho diagnóza velmi důležitá. Lidé jsou infikováni hlavně konzumací syrového nebo nedostatečně tepelně upraveného jídla z moře nebo znečištěných vod, ale také infekcí rány.

Z tohoto důvodu by klinické laboratoře měly zahrnout TCBS agar do studie kultury stolice kapalných vzorků stolice, zejména s výskytem rýžové vody. Zvláště pokud pacient uvádí, že byl v kontaktu s mořskou vodou nebo konzumoval měkkýše nebo ryby.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 zaseto
  • 5 Omezení
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Reference

Základ

Kvasinkový extrakt, masové peptony a triptein jsou výživovým zdrojem tohoto média. TCBS agar je však nehostinným médiem pro většinu bakterií..

Jeho vysoká selektivita je dána přídavkem citrátu sodného a žluči; obě jsou inhibičními látkami, které médiu také poskytují alkalické pH, omezují růst doprovodné flóry a podporují růst V. cholerae, mimo jiné druhy. Zejména Vibrio cholerae je velmi citlivý na kyselost.

Chlorid sodný osmoticky vyvažuje médium. Kromě toho, protože je jeho koncentrace vysoká, působí také jako inhibiční činidlo a podporuje růst halofilních bakterií..

Sacharóza je fermentovatelný cukr, který společně s modrými indikátory pH bromthymolu a thymolové modři dávají médiu jeho diferenciální charakter. Z tohoto důvodu je s tímto médiem možné odlišit kmeny fermentující sacharózu od nefermentujících..

U kolonií kmenů fermentujících sacharózu se zbarví žlutě a produkcí kyseliny změní médium ze zelené na žlutou. Nefermentory rostou průsvitné a médium zůstává původní barvou (zelená).

Stejně tak toto médium obsahuje thiosíran sodný jako zdroj síry a citrát železitý jako vyvolávací činidlo. Oba ukazují bakterie schopné produkovat sirovodík (bezbarvý plyn). HdvaS se tvoří z thiosíranu a následně, po reakci s citrátem železitým, se vytvoří viditelná černá sraženina..

Nakonec je agar ten, který médiu poskytuje pevnou konzistenci.

Příprava

Naváží se 89 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Pomozte rozpuštění zahřátím a častým mícháním. Směs může být vařena až 2 minuty..

Toto médium není autoklávováno. Po rozpuštění se nanese přímo na sterilní misky. Když ztuhnou, jsou uspořádány obráceným způsobem do plaket a uloženy do použití v chladničce (2-8 ° C)..

Médium po přípravě musí zůstat na hodnotě pH 8,6 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová nebo zeleno-béžová a barva média je lesně zelená nebo modrozelená.

Je důležité nechat desky před naočkováním vzorků zahřát..

Použití

Nejběžnějším vzorkem pro izolaci Vibrio je průjmová stolice..

Vzorky stolice, pokud nemohou být okamžitě nasazeny na selektivním médiu, musí být transportovány na médiu Cary Blair..

Pro zvýšení citlivosti kultury mohou být výkaly procházeny peptonovou vodou o pH 8,4 jako obohacovacím médiem po dobu maximálně 8 hodin, odtud jsou subkultivovány do média TCBS..

Mělo by se také vzít v úvahu, že některé kmeny Vibria mohou u imunosuprimovaných pacientů způsobit septikemii, proto je lze izolovat z krevních kultur. Podobně mohou být analyzovány vzorky vody a jídla z moře, pokud dojde k epidemii epidemie cholery..

Zaseto

Inokulum zkoumaného vzorku musí být výrazné, výsev se provádí metodou pruhování vyčerpáním. Destičky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobióze.

Pravděpodobné kolonie Vibrio cholerae jsou středně velké, hladké, neprůhledné, tenké a žluté barvy díky fermentující sacharóze.

Podobně druh V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii a nějaký V. vulnificus. Jiné klinicky významné druhy Vibrios, jako je V. parahaemolyticus nefermentujte sacharózu, která se vyvíjí jako olivově zelené kolonie.

TCBS agarová deska naočkovaná Vibrio parahaemolyticus. Zdroj: isis325 Flickr

Na druhou stranu je třeba mít na paměti, že v tomto médiu mohou růst některé kmeny Aeromonas a Plesiomonas, které jsou oxidázou (+) a vytvářejí žluté kolonie, které mohou zmást lékaře. Zatímco některé kmeny Pseudomonas také oxidáza (+) rostou jako zelené kolonie V. parahaemolyticus.

Omezení

Oxidázový test, který je pozitivní na rod Vibrio, by nikdy neměl být prováděn z kolonií získaných z agaru TCBS, protože získaný výsledek bude falešně negativní. Sloučeniny uprostřed silně interferují s tímto testem. Proto musí být prováděno ze subkultur na krevním agaru..

QA

Aby se prokázalo, že médium je v dobrém stavu, je vhodné zasít známé nebo certifikované kontrolní kmeny a sledovat, zda růst splňuje očekávané vlastnosti..

K tomu můžete použít kmeny:

-Vibrio cholerae - uspokojivý růst (žluté kolonie, průsvitné ohraničení).

-Vibrio parahaemolyticus - uspokojivý růst (kolonie se zeleným středem a průsvitným okrajem).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - uspokojivý růst (žluté kolonie se svatozáří stejné barvy kolem kolonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - úplná nebo částečná inhibice (malé žluté nebo průsvitné kolonie).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - částečná nebo úplná inhibice (modré kolonie).

-Escherichia coli ATCC 25922 - zcela potlačeno.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - úplná nebo částečná inhibice. (Malé kolonie, zelený střed, průsvitný okraj).

Inkubace neinokulovaného média by měla být nezměněna.

Reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Dostupné na: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Dostupné na: bd.com
  3. Britannia Laboratories. TCBS Medium. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  4. Laboratoře Acumedia. TCBS agar. 2016. Dostupné na: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře