Vogel-Johnsonovo agarové zdůvodnění, příprava a použití

2995
Egbert Haynes

The Vogel-Johnsonův agar je pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium, speciálně vyvinuté pro izolaci Zlatý stafylokok. Toto médium vytvořili Vogel a Johnson v roce 1960 modifikací telluritového glycinového agaru formulovaného v roce 1955 Zebovitzem, Evansem a Nivenem..

Modifikace spočívala ve zvýšení koncentrace mannitolu přítomného v médiu a v zabudování indikátoru pH. Současný vzorec se skládá z tripteinu, kvasnicového extraktu, mannitolu, fosforečnanu draselného, ​​chloridu lithného, ​​glycinu, fenolové červeně, agaru, 1% roztoku teluritu draselného a vody..

Zdroj: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Je třeba poznamenat, že existují i ​​jiná média, která jsou, podobně jako Vogel-Johnsonův agar, selektivní pro izolaci S. aureus, jako je slaný mannitolový agar a Baird Parkerův agar. V tomto smyslu by se dalo říci, že základem Vogel-Johnsonova agaru je směs mezi slaným mannitolovým agarem a agarem Baird Parker..

V první kolonie S. aureus Vyznačují se fermentací mannitolu a změnou žlutého indikátoru pH. Na druhou stranu, ve druhé S. aureus vyznačuje se redukcí teluritu na tellur a vytvářením šedých až černých kolonií. Obě vlastnosti jsou pozorovány na Vogel-Johnsonově agaru..

Toto médium, stejně jako jeho protějšky, je užitečné pro detekci Zlatý stafylokok ve vzorcích potravin, hygienických kontrolách průmyslových výrobků a v klinických vzorcích.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Dodávka živin
    • 1.2 Selektivní síla
    • 1.3 Diferenční výkon
    • 1.4 Osmotická rovnováha a tuhnoucí činidlo
  • 2 Příprava
    • 2.1 Roztok teluritu draselného v 1% hmotn./obj
    • 2.2 Vogel-Johnson Agar Base Medium
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Reference

Základ

Dodávka živin

Médium Vogel-Johnson obsahuje triptein a kvasnicový extrakt; Obě látky poskytují aminokyseliny s dlouhým řetězcem, které slouží jako zdroje uhlíku a dusíku nezbytné pro růst bakterií. Bakterie schopné růstu v tomto médiu budou přijímat živiny z těchto látek..

Selektivní síla

Vogel-Johnsonův agar je schopen inhibovat růst gramnegativních bakterií a dokonce i některých grampozitivních bakterií, což podporuje vývoj stafylokoků pozitivních na koagulázu. Inhibičními látkami jsou telurit draselný, chlorid lithný a glycin..

Diferenční výkon

Látky, které tvoří toto diferenciální médium, jsou mannitol a telurit draselný. Mannitol je sacharid a při jeho fermentaci vznikají kyseliny, díky nimž se médium mění z červené na žlutou, což se děje díky přítomnosti červeného indikátoru pH fenolu..

Zatímco bezbarvý telurit, když je redukován na volné kovové telurium, má tmavě šedou až černou barvu..

The Zlatý stafylokok fermentuje mannitol a redukuje telurit na telur. Proto jsou typické kolonie S. aureus v tomto médiu jsou šedé nebo černé obklopené žlutým médiem.

Bakterie, které rostou v tomto médiu a neredukují tellurit ani nefermentují mannitol, vytvoří průhledné kolonie obklopené červeně zbarveným médiem, dokonce intenzivnějším než původní barva, díky alkalizaci média použitím peptonů.

Na druhé straně bakterie, které redukují telurit, ale nefermentují mannitol, budou růst jako šedé nebo černé kolonie obklopené temně červeným médiem..

Pokud bylo médium připraveno bez přidání teluritu draselného, ​​kolonie z S. aureus by se vyvinuly jako žluté kolonie obklopené žlutým médiem, jako na slaném agaru s mannitolem.

Osmotická rovnováha a ztužující látka

Fosforečnan draselný udržuje osmotickou rovnováhu média a upravuje pH na neutralitu 7,2. Zatímco agar dodává kultivačnímu médiu pevnou konzistenci.

Příprava

Roztok teluritu draselného 1% w / v

Tento roztok není obsažen v dehydratovaném médiu, protože jej nelze sterilizovat v autoklávu. Z tohoto důvodu se připravuje samostatně a přidává se do již sterilizovaného média..

Některé komerční domy prodávají hotový 1% roztok teluritu draselného. Pokud se chcete připravovat v laboratoři, postupujte následovně:

Naváží se 1,0 g teluritu draselného a odměří se 100 ml destilované vody. Tellurit draselný se rozpustí v části vody a poté se doplní množství vody až do dosažení 100 ml. Roztok sterilizujte filtrační metodou.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Naváží se 60 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se zahřívá k varu, aby se napomohlo úplnému rozpuštění. Během procesu rozpouštění se médium často míchá.

Sterilizujte v autoklávu při tlaku 15 liber a teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte jej odpočívat, dokud médium nedosáhne teploty přibližně 45 až 50 ° C. Přidejte 20 ml dříve připraveného 1% roztoku teluritu draselného.

Promíchejte a nalijte do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout a objednejte převrácené na držáky talířů, abyste je později uložili do chladničky až do použití.

Konečné pH připraveného média musí být 7,2 ± 0,2.

Před zasetím vzorku počkejte, až destička dosáhne pokojové teploty..

Barva připraveného média je červená.

Použití

Ačkoli to může být použito pro izolaci S. aureus v jakémkoli typu vzorků se používá hlavně pro mikrobiologickou analýzu farmaceutických výrobků, kosmetiky a potravin.

Doporučuje se, aby bylo inokulum husté. Výsev lze provádět pruhováním pomocí platinové rukojeti nebo povrchem pomocí špachtle Drigalski.

Destičky se inkubují při 35-37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v aerobióze.

QA

K provedení kontroly kvality na médiu Vogel-Johnson lze použít následující kontrolní kmeny:

Zlatý stafylokok ATCC 25923, Zlatý stafylokok ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekávaný výsledek je následující: pro kmeny S. aureus Uspokojivý růst s černými koloniemi obklopenými žlutým médiem. V následujících situacích S. epidermidis pravidelný růst s průsvitnými nebo černými koloniemi obklopenými červeným médiem.

Stejně tak pro E-coli očekává se celková inhibice a pro Proteus mirabilis částečná nebo úplná inhibice; pokud poroste, bude to dělat střídmě a kolonie budou černé obklopené červenou polovinou.

Reference

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel a Johnson Agar). 2006. Dostupné na: bd.com
  2. Britannia Laboratories. Vogel-Johnsonův agar. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  3. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015. Dostupné na: britania.com
  4. Himediální laboratoř. Vogel-Johnsonův agar střední. 2018. Dostupné na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnsonova agarová základna. Příručka mikrobiologie Merck. 12. vydání, str. 502-503. K dispozici na: Uživatelé / Tým / Stahování
  6. Přispěvatelé z Wikipedie, „Ágar Vogel Jonhson“, Wikipedia encyklopedie zdarma,   k dispozici na: wikipedia.org.
  7. Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Jídlo. Izolace a počítání Zlatý stafylokok. K dispozici v:sencamer.gob.ve

Zatím žádné komentáře