Základ laktózového bujónu, příprava a použití

832
Sherman Hoover

The laktózový vývar je kapalné neselektivní kultivační médium, které se používá hlavně jako médium před obohacením při izolaci kmenů Salmonella z mikrobiologické analýzy prováděné na zpracovaných potravinách, mléčných výrobcích nebo vodě. To doporučuje Mezinárodní komise pro mikrobiologické specifikace pro potraviny (ICMPF).

Médium obsahuje enzymatický rozklad želatiny, masového extraktu a laktózy, látek nezbytných pro růst bakterií. Laktóza je navíc fermentovatelný sacharid, a proto jsou některé koliformní bakterie schopny ji štěpit produkcí plynu..

Laktované vývary se zakalením. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil

Z tohoto důvodu je laktózový bujón doporučován Americkou asociací pro veřejné zdraví (APHA) pro předpokládané studium celkových a fekálních koliformních bakterií, což jej kvalifikuje jako vynikající alternativu k nahrazení bujónu tryptose lauryl sulfát standardní technikou nejpravděpodobnějšího čísla ( MPN).), Používané pro mikrobiologickou analýzu vzorků potravin, mléka a povrchových, podzemních, rekreačních, domácích a průmyslových odpadních vod.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
  • 3 použití
    • 3.1 Před obohacení
    • 3.2 Analýza celkových a fekálních koliformních bakterií
  • 4 Kontrola kvality média
  • 5 Reference

Základ

Pro mikrobiologickou analýzu některých vzorků je nezbytný krok před obohacením, aby bylo možné získat specifický mikroorganismus, který může být ve velmi malém množství nebo za nepříznivých podmínek, které narušují nebo minimalizují jeho životaschopnost..

To je případ sušených a zpracovaných potravin, které mohou být kontaminovány Salmonellas sp. V těchto případech, pokud jsou bakterie přítomny, utrpěly během výrobního procesu produktu fyzické a chemické zneužití..

Takovým způsobem, že mikroorganismy jsou vystaveny nepříznivým faktorům, jako je dehydratace, expozice inhibičním nebo toxickým produktům, a překrytí generované přítomností jiných bakterií ve větším množství, mimo jiné..

V tomto smyslu má laktózový bujón opravný účinek na poškozené struktury mikroorganismu, což způsobuje jeho zotavení a reprodukci takovým způsobem, že jej lze detekovat.

Podobně má laktózový bujón schopnost ředit inhibiční látky, které mohou ovlivnit jeho životaschopnost, což umožňuje jeho vývoj. Kromě toho je nutriční složení laktózového bujónu strategické pro podporu růstu Salmonella sp nad jinými mikroorganismy.

Pro konečnou identifikaci použijte subkulturu na jiná definitivní kultivační média.

Na druhé straně složení média také umožňuje detekci laktózy fermentujících mikroorganismů, které produkují plyn..

Příprava

K přípravě jednoho litru laktózového bujónu je třeba zvážit 13 gramů dehydratovaného média a rozpustit jej v 1000 ml destilované vody..

Aby se pomohlo rozpustit médium ve vodě, lze roztok trochu zahřát, ale ne příliš..

Jakmile je homogenní, roztok se připraví následujícím způsobem: pokud se bude bujón používat k hledání koliformních bakterií, připraví se stojan se zkumavkami, do kterého se vzhůru nohama vloží zkumavka Durham.

Durhamova trubice je velmi důležitý detail, protože umožňuje detekci tvorby plynů, což jsou údaje, které mají velkou hodnotu při hledání koliformních bakterií.

Jakmile jsou zkumavky připraveny, přidá se do nich 10 ml mléčného bujónu, což je množství, které musí stačit k pokrytí celé zkumavky Durham..

Pokud se má laktózový bujón použít jako bujón před obohacením, není nutné umístit Durhamovu fermentační zkumavku. V takovém případě je zapotřebí většího množství média (225 ml), které bude podáváno v 500 ml lahvích se širokými ústy as tepelně odolným šroubovacím uzávěrem..

Následně se zkumavky nebo baňky 15 minut autoklávují při 121 ° C..

Médium musí zůstat při konečném pH 6,9 ± 0,2 při 25 ° C.

Vývary jsou až do použití skladovány v chladničce.

Před použitím je třeba bujóny zahřát na pokojovou teplotu.

Na druhou stranu lze laktózový bujón také připravit ve dvojité koncentraci..

Některé laboratoře přidávají bromokrezolovou fialovou do laktózového bujónu jako indikátor pH, aby ukázaly zkumavky, kde došlo ke fermentaci laktózy kvůli změně barvy. V tomto případě má bujón fialovou barvu a pokud dochází k fermentaci, změní se na žlutou.

Aplikace

V mikrobiologických laboratořích je široce používán laktózový bujón, protože se jedná o relativně levné médium, které nabízí spolehlivé a rychlé výsledky (24-48 hodin)..

Může být použit k analýze celkových a fekálních koliformních bakterií v potravinách a ve vodě nebo jako pre-obohacující vývar pro Salmonella.

Před obohacením

Předběžné obohacení je krok před obohacením vzorku, což výrazně zlepšuje regeneraci bakterií rodu Salmonella ve zpracovaných potravinách..

Za tímto účelem se vzorek pevné potraviny (25 gramů) nebo kapaliny (25 ml) naočkuje do 225 ml laktózového bujónu, inkubuje se po dobu 24 až 48 hodin. Následně bude subkultivován v obohaceném médiu, jako je seleničitý cystinový bujón nebo tetrathionátový bujón. Poté přejděte na selektivní média XLD a SS.

Celková a fekální koliformní analýza

Je to vynikající médium jako indikátor fekální kontaminace.

Proto je laktózový bujón ideální pro předpokládanou fázi studia koliformních bakterií metodou nejpravděpodobnějšího počtu..

U vzorků, u nichž existuje podezření na velké množství koliformních bakterií, bude naočkováno menší množství (1 ml), zatímco u vzorků, u nichž je podezření na menší množství koliformních bakterií, bude naočkováno větší množství vzorků (10 ml) ..

Pro analýzu se provede ředění 10-1, 10-dva, 10-3, vytvoření baterie 3–5 zkumavek pro každou použitou koncentraci.

Z každého naředění se vysaje stejný objem do laktózových bujónů.

Zkumavky se inkubují po dobu 24 hodin. Negativní bujóny se inkubují dalších 24 hodin.

Interpretace výsledků se provádí sledováním dvou charakteristik: první je přítomnost nebo nepřítomnost zákalu a protože toto médium neobsahuje indikátor pH, nedojde ke změně barvy..

Druhým je či není výroba plynu. Plyn je v Durhamově trubici snadno patrný podle vzhledu jedné nebo více vzduchových bublin uvnitř..

Považuje se za pozitivní, pokud jsou pozorovány obě charakteristiky, tj. Zákal s produkcí plynu. Pozitivní zkumavky by měly být znovu naočkovány do konfirmačního média (Brilliant Green Bile 2% bujón a EC bujón).

Kontrola kvality média

- Při přípravě média je důležité nezapomenout umístit Durhamsovy trubice, pokud je účelem této trubice studium koliformních bakterií..

- Před sterilizací médium nepřehřívejte.

- Rozdělte do zkumavek před sterilizací, nikdy poté.

- Nepoužívejte, pokud je médium starší než 3 měsíce..

- Nepoužívejte, pokud zaznamenáte jakoukoli změnu obvyklých vlastností média.

- Při přípravě šarže laktózového bujónu otestujte kvalitu šarže výsadbou kmenů známých jako Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. Rostou velmi dobře, s produkcí plynu (pozitivní kontrola).

- Může také zahrnovat Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium nebo Enterococcus faecalis, které dobře rostou, ale bez produkce plynu (negativní kontrola).

- Je třeba poznamenat, že původní barva dehydratovaného média je béžová a barva připraveného média je velmi světlá a průhledná žlutá. Pokud je pozorována změna barvy nebo vzhledu, může se zhoršit..

Reference

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologie prostředí a mikrobiologie. (2013), 1. vydání. University of Cartagenas, Kolumbie.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. (2009). Techniky pro mikrobiologickou analýzu potravin. 2. vyd. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  3. Laboratoře Conda Pronadisa. 2017. Laktózový bujón s dvojnásobnou koncentrací (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Srovnání technik pro extrakci koliformních bakterií ze sedimentu jezera Xochimilco v Mexiku. Rev. Argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. K dispozici na: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Stanovení mikrobiologické kvality artéských studenských vod okresů ústředního, kordillerského a hlavního magistrátu. Mem. Inst. Investig. Věda. Zdraví 2013; 11 (1): 5-14. Dostupné z: scielo.iics.

Zatím žádné komentáře