Základ, příprava a použití tetrathionátového bujónu

4311
Philip Kelley

The tetrathionátový vývar nebo TT bujón je selektivní kapalné kultivační médium pro obohacení a získání kmenů rodu Salmonella. Vytvořil jej Müeller a později jej upravil Kauffmann, proto existují lidé, kteří mu říkají vývar Müeller-Kauffmann.

Původní médium obsahovalo proteózové peptony, uhličitan vápenatý a thiosíran sodný. Kauffmann do ní přidal žlučové soli a vytvořil další modalitu s jasně zelenou barvou. Tyto látky inhibují růst koliformních bakterií a ponechávají médium volné pro vývoj patogenních bakterií, v tomto případě Salmonella.

Přidání jodového roztoku k tetrathionátovému bujónu. Zdroj: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Modifikace byla velmi úspěšná, protože významně zvýšila citlivost média. Z tohoto důvodu je v současné době užitečné pro hledání Salmonellas v jakémkoli typu vzorku, ale zejména v případě pevné nebo tekuté stolice a potravy..

Jeho příprava se skládá ze dvou fází; komerční médium je základna pro přípravu tetrathionátového bujónu a následně, aby bylo možné vytvořit tetrathionát, se přidá jodovaný jodový roztok k doplnění média.

Americká asociace pro veřejné zdraví (APHA) doporučuje použití tetrathionátového bujónu doplněného jasně zelenou barvou k obohacení vzorků pro salmonely, protože je selektivnější než tetrathionátový bujón a selenitový bujón..

Obecně je tetrathionátový bujón ideální, pokud existuje podezření na přítomnost bakterií rodu Salmonella v malém množství nebo pokud jsou zneužívány expozicí inhibičním látkám nebo průmyslovými procesy, které minimalizují jejich životaschopnost..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2,1 - Tetrathionátový vývar
    • 2,2 - Variantní tetrathionátový bujón s jasně zelenou barvou
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 doporučení
  • 6 Reference

Základ

Přítomné peptony odpovídají pankreatickému trávení kaseinu a peptickému trávení živočišné tkáně. Poskytují zdroj uhlíku, dusíku a obecných živin pro růst bakterií..

Thiosíran sodný reaguje s jodovaným roztokem za vzniku tetrathionátu. To inhibuje růst koliformních bakterií a podporuje vývoj bakterií, které obsahují enzym tetrathionátreduktázu, mezi nimi je rod Salmonella, ale také Proteus.

Žlučové soli také působí jako inhibiční látka pro většinu grampozitivních a některých gramnegativních bakterií (koliformních bakterií)..

Uhličitan vápenatý absorbuje toxické látky generované rozkladem tetrathionátu, který tvoří kyselinu sírovou. V tomto smyslu uhličitan vápenatý neutralizuje kyselost a udržuje pH média stabilní..

V případě jasně zelené modality tato látka zvyšuje selektivní sílu tetrathionátového bujónu inhibicí jiných mikroorganismů než rodu Salmonella..

Příprava

-Tetrathionátový vývar

Jódový roztok jódu

Vážit:

  • 6 gramů jódu.
  • 5 g jodidu draselného.

Jodid draselný se rozpustí v přibližně 5 ml sterilní destilované vody, poté se postupně přidává jód, zatímco se směs zahřívá. Po úplném rozpuštění doplňte sterilní destilovanou vodou po rysku až do konečného objemu 20 ml..

Základní médium pro tetrathionátový bujón

Naváží se 46 gramů dehydratovaného média a suspenduje se v 1 litru sterilní destilované vody. Smíchejte a zahřejte, dokud se úplně nerozpustí, může se vařit jen několik minut. Neautoklávujte. Báze média se nechá ochladit na přibližně 45 ° C a poté se přidá 20 ml jodovaného roztoku..

Po přidání jodidového roztoku do média by měl být okamžitě použit. Pokud nechcete použít celou směs, postupujte následovně:

10 ml základního média se rozdělí do zkumavek a pouze do těch, které se naočkují vzorky, se přidá 0,2 ml jodovaného roztoku..

Ty, které se nebudou používat, lze stále skladovat v chladničce, ale protože médium není sterilizováno, je ideální připravit přesné množství, které je potřeba..

Barva média před přidáním jodu jodového roztoku je mléčně bílá s bílou sraženinou a po přidání je hnědá s hustou sraženinou. Pozorovaná sraženina je normální a odpovídá uhličitanu vápenatému, který se nerozpouští. Konečné pH média je 8,4 ± 0,2.

-Varianta brilantně zeleného tetrathionátového vývaru

K přípravě jasně zelené tetrathionátové půdy se provedou všechny kroky popsané výše, ale navíc se ke směsi přidá 10 ml jasně zelené barvy připravené v 0,1%..

Svítí zeleně

Toto řešení je připraveno následujícím způsobem:

Naváží se 0,1 g jasně zelené barvy a suspenduje se ve 100 ml destilované vody. Zahřejte k varu, abyste dosáhli úplného rozpuštění. Skladujte v jantarové lahvičce.

Použití

U vzorků stolice (kultivace stolice) je protokol následující:

Naočkujte 1 g pevné stolice nebo 1 ml tekuté stolice do zkumavky 10 ml hotového tetrathionátového bujónu. Intenzivně protřepejte a inkubujte aerobně při teplotě 43 ° C po dobu 6-24 hodin.

Poté se odebere alikvot 10 až 20 ul bujónu a subkultivuje se v selektivním médiu pro Salmonella, jako je SS agar, XLD agar, jasně zelený agar, Hektoen enterický agar, mimo jiné..

Souběžně by měla být naočkována selektivní média pro Salmonella přímým vzorkem (výkaly) bez obohacení. U vzorků z rektálního výtěru odeberte sebraný materiál do zkumavky a postupujte podle výše uvedeného popisu..

U vzorků potravin zvažte 10 g tuhého jídla nebo 10 ml tekutého jídla a naočkujte lahvičku 100 ml hotového tetrathionátového bujónu. Postupujte stejným způsobem, jak je popsáno výše, ale inkubujte při 37 ° C.

Jak je vidět, vztah mezi vzorkem a bujónem bude vždy 1:10.

QA

K testování kultivačního média lze použít známé kontrolní kmeny. Nejpoužívanější jsou kmeny certifikované ATCC.

Kmeny, které se mají použít, jsou Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 a Zlatý stafylokok ATCC 25923.

Očekává se vynikající vývoj u kmenů Salmonella Escherichia coli může mít slabý nebo pravidelný vývoj a grampozitivní kmeny (Enterococcus a Staphylococcus) jsou částečně nebo úplně inhibovány.

doporučení

-Protože toto médium neinhibuje růst Proteus, některé laboratoře používají k umístění 40 mg / l novobiocinu, aby zabránily vývoji tohoto mikrobiálního kmene. Antibiotikum musí být přidáno před roztokem jódu..

-Po přípravě média obsahujícího jodový roztok jódu by nemělo trvat naočkování déle než 2 hodiny..

-Při distribuci média do zkumavek musí být směs kontinuálně homogenizována, aby se resuspendovala vytvořená sraženina..

-V méně kontaminovaných vzorcích se tetrathionátový bujón inkubuje při 35-37 ° C a ve vysoce kontaminovaných vzorcích se doporučuje inkubace při 43 ° C..

Reference

  1. Laboratoř Conda Pronadisa. 2010. Tetrathionátový bujónový základ podle Müell-Kauffmanna. K dispozici v:
  2. BD Laboratories. 2003. Základna tetrathionátového bujónu. K dispozici v:
  3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranátový základní vývar. K dispozici v:
  4. BBL Media. 2005. Přípravky pro kultivaci druhů Salmonella ve zkumavkách.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Srovnání mezi seleničitanem sodným a tetrathionátovým kultivačním médiem, oba inkubovány při 37 ° C a 42 ° C pro izolaci Salmonella spp výkalů dopravců. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220

Zatím žádné komentáře