Odůvodnění, příprava a použití agaru na žlučový eskulin

2973
David Holt

The agar žlučových eskulinů Jedná se o selektivní a diferenciální pevné kultivační médium. Používá se jako diagnostický test ke stanovení schopnosti určitého mikroorganismu růst v médiu obsahujícím žluč a také rozkládat glukosidový esculin na eskuletin a glukózu..

Tento diagnostický test se používá k rozlišení druhů rodu Streptococcus patřících do skupiny D (pozitivní na žlučový eskulin) od jiných skupin Streptococcus, které na tento test reagují negativně..

Destička agaru se žlučovým eskulinem, naočkovaná kmenem Enterococcus (pozitivní test). Zdroj: Nebyl poskytnut žádný strojově čitelný autor. Philippinjl předpokládá (na základě stížností na porušení autorských práv). [Veřejná doména]

Je třeba poznamenat, že někteří Streptococcus ze skupiny viridanů mohou hydrolyzovat esculin, ale nejsou schopni růst v přítomnosti žluči v koncentraci 40%, proto je v tomto médiu reakce pro tuto skupinu negativní.

Na druhé straně je médium žlučového esculinu také užitečné pro diagnostiku Listeria monocytogenes nebo druhy Aerococcus sp, protože tyto mikroorganismy jsou žluční eskulin pozitivní.

Eskulinový žlučový agar se skládá z peptonu, masového extraktu, žlučové žluči, esculinu, citrátu železitého, agaru a destilované vody. Některé komerční domy zahrnují azid sodný ve složení média.

Médium lze připravit v laboratoři, pokud máte všechny sloučeniny samostatně, nebo ho lze připravit z komerčního dehydratovaného média..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Domácí příprava agaru na žlučový eskulin
    • 2.2 Příprava agaru žlučových eskulinů z komerčního média
  • 3 použití
    • 3.1 Výsev
    • 3.2 Výklad
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Médium žlučového esculinu obsahuje peptony a masový extrakt, obě sloučeniny poskytují potřebné živiny pro růst mikroorganismů.

Obsahuje také esculin; Tato sloučenina je glukosid tvořený spojením jednoduchého monosacharidu (glukózy) se sloučeninou zvanou 6,7-dihydroxykumarin nebo esculetin (aglukon), spojený acetalem nebo glukosidovou vazbou.

Test je založen na prokázání, zda jsou bakterie schopné hydrolyzovat esculin. Pokud k tomu dojde, eskulin se rozpadne na eskuletin a glukózu. Esculetina reaguje se železem přítomným v médiu a vytváří tmavě hnědou, téměř černou sloučeninu.

To znamená, že citrát železitý působí jako vývojka reakce. Tato vlastnost činí z agaru žluči esculin diferenciální médium..

Žluč je inhibitor, který brání růstu některých mikroorganismů, a proto musí být bakterie schopny před štěpením esculinu růst v přítomnosti žluči. Proto je toto médium považováno za selektivní.

Bakterie, které se mohou vyvinout v tomto prostředí, jsou hlavně ty, které žijí ve střevním prostředí.

V tomto smyslu některé komerční společnosti přidávají do média azid sodný, aby dále inhibovaly růst enterických gramnegativních bacilů, čímž zvyšují selektivitu média pro růst Streptococcus..

Nakonec agar dává médiu pevnou konzistenci a voda je rozpouštědlem sloučenin..

Příprava

Domácí příprava agaru na žlučový eskulin

Vážit:

5 g peptonů

3 g masového extraktu

40 g hovězí žluči

1 g esculinu

0,5 g citrátu železitého

15 g agaru

1000 ml destilované vody

V případě přidání azidu sodného navažte 0,25 g / litr a přidejte do směsi.

Složky se rozpustí v litru destilované vody a zahřívají se, dokud se sloučeniny úplně nerozpustí. Rozdělte 5 ml do zkumavek se šroubovacím uzávěrem 16 x 125 mm. Autoklávování při 121 ° C, tlak 15 liber po dobu 15 minut.

Vyjměte z autoklávu a zkumavky nakloňte na podložku, aby agar ztuhl v širokém zobáku.

Uchovávejte v chladničce až do použití. Před výsevem nechejte pokojovou teplotu.

Lze připravit také agarové desky se žlučovým eskulinem; v tomto případě je celá směs autoklávována v baňce a následně distribuována do sterilních Petriho misek. Jsou ponechány ztuhnout a uloženy v chladničce..

Hodnota pH média musí být 6,6 ± 0,2.

Příprava agaru žlučových eskulinů z komerčního média

Zvažte množství určené vložkou. To se může u jednotlivých obchodních domů lišit. Následně postupujte stejně jako výše vysvětlený postup.

PH média by mělo být 6,6 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je tmavě jantarové.

Komerční médium na žluč Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Aplikace

Médium žlučového esculinu se používá hlavně k odlišení streptokoků skupiny D (pozitivní na žlučový eskulin) od zbytku skupin Streptococcus (negativní na žlučový eskulin).

Kombinace testu růstu přesyceného bujónu s testem na žlučový eskulin lze použít k identifikaci speciální skupiny streptokoků skupiny D zvané Enterococcus.

Tato speciální skupina Streptococcus patří do skupiny D zmíněného rodu a je schopná hydrolyzovat esculin za přítomnosti žluči stejně jako ostatní členové skupiny D, ale je také schopna se vyvíjet v hypersolovaném médiu (BHI s chlorid 6,5% sodíku), což je rozdíl.

Proto se streptokoky, které hydrolyzují eskulinovou žluč, ale nerostou v hypersolovaném bujónu, nazývají ne-enterokoky skupiny D streptokoky..

Zaseto

Inokulujte médium nejlépe z čistého 24hodinového bujónu Todd-Hewitt.

Přidejte 2 kapky na povrch média pomocí Pasteurovy pipety a rozetřete v médiu platinovou smyčkou..

Inkubujte při teplotě 35 ° C po dobu 48 hodin, zatímco je inkubační doba splněna, lze ji sledovat, aby se zjistilo, zda došlo k pozitivní reakci. Pokud na konci doby reakce zůstane negativní, lze ji inkubovat až 72 hodin.

Výklad

Pozitivní reakce: Vzhled tmavě hnědé, téměř černé barvy v zobáku flétny (v případě tubové zkoušky) nebo zčernalé agaru kolem kolonií (v případě destičkové zkoušky).

Negativní reakce: po 72 hodinách inkubace se u méně než poloviny zkumavky neobjeví žádné zčernalé médium nebo černá. Na druhé straně by měl být růst bakterií v médiu bez výskytu černé barvy považován za negativní test..

QA

Chcete-li vyhodnotit kvalitu média, kmen Enterococcus faecalis ATCC 29212 jako pozitivní kontrola a kmen Streptocococus, který nepatří do skupiny D, jako negativní kontrola.

Omezení

-Média, která neobsahují azid sodný, umožňují růst enterosolventních gramnegativních tyčinek. Některé z nich mohou zčernat střed.

- Některé komerční domy přidávají nízkou koncentraci žluči (10%), a proto se v médiu může vyvinout nějaký Streptococcus, který nepatří do skupiny D, a hydrolyzovat esculin, což může vést k chybám při interpretaci..

Reference

  1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. vyd. Redakční Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  4. Laboratoř Britannia. Eskulinová žluč s azidovým agarem. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  5. „Agar žlučových esculinů.“ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 22. srpna 2017, 17:30 UTC. 22. dubna 2019, 17:35. en.wikipedia.org.
  6. Laboratorios Bd. Agarové sklony se žlučovým eskulinem. 2015. Dostupné na: bd.com
  7. Neogen Laboratories. Agar žlučových eskulinů. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com

Zatím žádné komentáře