Cetrimidové agarové zdůvodnění, příprava, použití

4542
Abraham McLaughlin

The cetrimidový agar o cetrimid je selektivní pevné kultivační médium určené pro izolaci Pseudomonas aeruginosa. Je založen na zvýraznění produkce charakteristických pigmentů tohoto druhu a byl vyroben modifikací Tech agaru, kterou vytvořili King, Ward a Raney..

Původní vzorec obsahoval soli chloridu hořečnatého, síranu draselného, ​​trávení želatiny pankreatem a agar-agar. Úprava vzorce spočívala v přidání cetrimidu (cetyltrimethylamoniumbromidu) a glycerolu.

Cetrimidový agar naočkovaný Pseudomonas aeruginosa Zdroj: BiotechMichael [public domain], z Wikimedia Commons

Cetrimidový agar je užitečný pro mikrobiologické studium vzorků, kde je přítomnost Pseudomonas aeruginosa. Je třeba poznamenat, že tato bakterie je nanejvýš důležitá, protože ačkoli je součástí normální mikrobioty prostředí, často se chová jako oportunní patogen.

Jedním z nejčastějších problémů způsobených tímto zárodkem jsou proto nozokomiální infekce, tedy ty, které se vyskytují v nemocničním prostředí a napadají pacienty se sníženou imunitou..

Na druhé straně, vzhledem k afinitě, kterou tento mikroorganismus má k vlhkosti, jsou nejzranitelnější cíle kontaminace: asistované dýchací přístroje, léky, rozprašovače, vodní zdroje, klimatizace, dezinfekční prostředky, mýdlové roztoky, injekční roztoky, otevřené rány, katétry, močové trubice, mimo jiné.

V tomto smyslu je cetrimidový agar užitečný k provádění mikrobiologických kontrol a kultivace výše zmíněných prvků..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Výklad
  • 2 Příprava
  • 3 použití
  • 4 zaseto
  • 5 Omezení
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Reference

Základ

Cetrimidový agar je založen na schopnosti média podporovat růst P. aeruginosa, stimulují produkci svých pigmentů a naopak inhibují růst dalších mikroorganismů.

Tyto vlastnosti jsou způsobeny funkcí každé z jejích složek. Přítomný želatinový pepton slouží jako zdroj dusíku, vitamínů a minerálů. Jako zdroj uhlíku funguje glycerol nebo glycerin.

Cetrimid (cetyltrimethylamoniumbromid) je látka, která inhibuje růst bakterií jiných než P. aeruginosa, včetně dalších druhů patřících do stejného rodu.

K inhibici dochází, protože cetramid působí jako kationtový detergent, který dokáže destabilizovat plazmatickou membránu většiny bakterií, kromě P. aeruginosa a některé další, kterým se podaří přežít.

Na druhou stranu obsahuje chlorid hořečnatý a síran draselný. Tyto sloučeniny stimulují fenotypovou expresi související se schopností Pseudomonas aeruginosa k výrobě různých pigmentů, včetně: pyocyaninu, pyoverdinu, pyorrubinu, pyomelaninu a fluoresceinu. Nakonec obsahuje agar-agar, který mu dodává pevnou konzistenci.

Výklad

Interpretace růstu získaného na tomto agaru se provádí následujícím způsobem:

Pozorování kulatých, hladkých kolonií s pravidelnými okraji, s produkcí modrozelených, zelených, hnědých nebo načervenalých pigmentů, plus emise ovocného pachu (aminoacetofenon), je předpokládaným výsledkem přítomnosti této bakterie v uvedeném vzorku..

Navíc je to indikativní pro P. aeruginosa pozorování jasně zelenožlutého pigmentu na koloniích, když je destička vystavena ultrafialovému světlu.

Fluorescence kolonií P. aeruginosa na agaru cetrimide pod ultrafialovým světlem.

Je třeba poznamenat, že každá pozorovaná barva je způsobena produkcí konkrétního pigmentu. Modrozelený pigment odpovídá produkci pyocyaninu, zelený až pyoverdin, načervenalý až pyorrubin, hnědý až pyomelanin a jasně žlutozelená fluorescence v UV světle až fluorescein..

Příprava

Naváží se 43 g dehydratovaného média a rozpustí se v destilované vodě. Přidejte 10 ml glycerolu. Přiveďte směs ke zdroji tepla. Vařte několik minut, dokud se úplně nerozpustí.

Autoklávujte při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Nechte stát a podávejte ve sterilních Petriho miskách, když je teplota kolem 50 ° C.

Nechte ztuhnout, převraťte, objednávejte v plaqueros a uchovávejte v chladničce až do použití. K naočkování agarových desek cetrimid musí být předem vyjmuty z chladničky a ponechány ohřát na pokojovou teplotu..

Konečné pH média musí být 7,2 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je neprůhledný bílý.

Aplikace

Na cetrimidovém agaru lze vysadit všechny typy vzorků, ve kterých je přítomnost Pseudomonas aeruginosa. Proto je užitečný ve všech oblastech mikrobiologie (environmentální, průmyslové, klinické, vodní a potravinové)..

Je velmi důležité analyzovat nemocniční prostředí, a tedy být schopen aplikovat nápravná opatření, protože tento mikroorganismus se k pacientům dostává prostřednictvím kontaminovaného vybavení, léků, roztoků a spotřebního materiálu, které pacient používá.

Tímto způsobem může mikroorganismus infikovat dolní dýchací cesty, močové cesty a rány pacientů s potlačenou imunitou..

Počty kolonií P. aeruginosa v mezních testech mikrobů.

Zaseto

Cetrimidový agar lze použít jako primární kulturu. Destička je naočkována na jednom ze svých okrajů a odtud je vyčerpáním distribuována na zbytek destičky. Kapalné vzorky lze povrchově naočkovat pomocí špachtle drigalski.

Destičky se inkubují aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace.

Omezení

-Malé procento kmenů  Pseudomonas aeruginosas neprodukují pyocyanin, takže lze interpretovat falešně negativní výsledek.

-V tomto prostředí jsou inhibovány některé klinicky významné druhy Pseudomonas.

-Přes dodržení charakteristik popsaných pro Pseudomonas aeruginosa, musí být potvrzeny dalším dokladem totožnosti. Zkouškou, kterou byste si neměli nechat ujít, je zkouška oxidázou, musí být pozitivní.

-Některé Enterobacteriaceae mohou růst na tomto médiu a vyvinout žlutý pigment, ale liší se od Pseudomonas aeruginosa v tom, že když je deska vystavena ultrafialovému světlu, nedochází k žádné fluorescenci.

-Serratia marcescens zvládá vývoj a produkuje růžový pigment.

-Pokud jsou desky naočkované agarem cetrimid vystaveny po určitou dobu pokojové teplotě, kmeny kmene P. aeruginosa mohou ztratit fluorescenci pozorovanou pod UV zářením, ale vlastnost se obnoví, pokud se znovu inkubuje při 37 ° C.

QA

K analýze dobrého výkonu cetrimidového agaru lze použít kontrolní kmeny, jako například: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 a Zlatý stafylokok ATCC 25923.

Očekávané výsledky jsou:

  • V následujících situacích P. aeruginosa dobrý růst, s modrozeleným pigmentem a pozitivním fluoresceinem.
  • S. maltophilia Y S. aureus bude částečně až zcela potlačen.
  • Očekává se to Escherichia coli být zcela potlačen.

Reference

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypová a sérologická charakterizace klinických izolátů Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratoře Conda Pronadisa. Cetrimidová agarová báze. 2014. Dostupné na: condalab.com
  3. Britannia Laboratories. Cetrimidový agar. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  4. BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Dostupné na: bd.com
  5. Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimidový agar. 2009. Dostupné na: http://f-soria.es

Zatím žádné komentáře