Odůvodnění, příprava a použití agaru na Salmonella-Shigella

1394
Basil Manning

The Agar Salmonella-Shigella také známý jako SS agar, je to mírně selektivní a diferenciální médium, speciálně navržené pro izolaci enteropatogenních bakterií rodů Salmonella a Shigella, jak z environmentálních, tak z klinických vzorků..

SS agar má komplexní složení; Skládá se z masového extraktu, peptonu, laktózy, žlučových solí, citrátu sodného, ​​thiosíranu sodného, ​​citrátu železitého, agaru, neutrální červené, jasně zelené a destilované vody. Vzhledem k jeho vysoké selektivitě lze zasít vzorky s bohatou smíšenou flórou..

SS agar s koloniemi Salmonella sp. Zdroj: Manurx27 [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], z Wikimedia Commons

V mikrobiologických laboratořích se médium Salmonella-Shigella široce používá k vyšetřování přítomnosti Salmonella a Shigella ve vzorcích průjmových stolic, odpadních vodách, pitné vodě a potravinách..

Někdy je k získání kmenů Salmonella nutné použít před obohacený bujón (laktózový bujón) a obohacovací bujón (seleničitý cystinový bujón).

Tyto kroky jsou nutné, pokud existuje podezření na přítomnost Salmonella ve velmi malém množství nebo pokud může být kmen zneužit procesem průmyslové výroby, zejména zpracovanými potravinami. Je také vhodné obohatit vzorky stolice od pacientů, kteří byli léčeni antibiotiky..

Následně může být obohacený bujón naočkován na agar Salmonella-Shigella a další podobná média, jako je xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD) a enterický Hektoenův agar (HE)..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Nutriční síla
    • 1.2 Konzistence
    • 1.3 Selektivní
    • 1.4 Diferenciál
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Omezení
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Reference

Základ

Každá složka kultivačního média Salmonella-Shigella má specifickou funkci a směs jako celek jí dává vlastnosti, které ji charakterizují..

Výživná síla

Masový extrakt a pepton (trávený kaseinem a živočišnou tkání) poskytují potřebné živiny (dusíky, uhlík a vitamíny) pro vývoj mikroorganismů schopných tolerovat ostatní složky..

Konzistence

Agar-agar je odpovědný za zajištění pevné konzistence média.

Selektivní

Toto médium je vysoce selektivní, protože obsahuje žlučové soli, citrát sodný a jasně zelenou barvu. Proto inhibuje růst všech grampozitivních bakterií a většiny gramnegativních bakterií, včetně některých koliformních bakterií..

Zatímco bakterie rodu Salmonella a některé kmeny Shigella tyto sloučeniny podporují.

Rod Salmonella je hlavně velmi odolný vůči žlučovým solím, a to natolik, že jsou schopni žít ve žlučníku u některých pacientů s nosičem, kteří neustále vylučují bakterie ve stolici..

Rozdíl

Laktóza je fermentovatelný sacharid, který pomáhá odlišit kmeny fermentující laktózu od nefermentujících. Tuto vlastnost dokazuje přítomnost indikátoru pH, kterým je v tomto médiu fenolová červeň.

Kmeny fermentující laktózu dávají červené kolonie, zatímco nefermentující kmeny jsou bezbarvé. Tato vlastnost je důležitá, protože Salmonella a Shigella nefermentují laktózu..

Na druhé straně toto médium obsahuje thiosíran sodný jako zdroj sulfidu a citrát železitý jako zdroj železa. Obě sloučeniny jsou schopné rozlišit bakterie schopné produkovat sirovodík. Tyto reagují za vzniku viditelné nerozpustné černé sraženiny síranu železitého..

Tato vlastnost se vyskytuje u některých kmenů rodu Salmonella. Normálně jsou jejich kolonie ploché bezbarvé s černou tečkou uprostřed. Zbytek Salmonellas neprodukuje HdvaS a vyvíjet se jako bezbarvé kolonie.

Na druhé straně jsou kolonie rodu Shigella ploché bezbarvé bez zčernalé..

Příprava

Toto médium je velmi jednoduché na přípravu.

Naváží se 63 g dehydratovaného komerčního média a rozpustí se v litru destilované vody. Roztok se zahřeje a míchá. Směs může vařit až minuty.

Toto médium nesmí být autoklávováno. Po rozpuštění se podává přímo na jednoduché nebo dvojité sterilní destičky..

Když ztuhnou, jsou uspořádány obráceným způsobem do plaket a uloženy do použití v chladničce (2-8 ° C)..

Médium po přípravě by mělo mít pH 7,2 ± 0,2 a oranžovo-červenou barvu..

Je důležité nechat desky před naočkováním vzorků zahřát. Původní vzorek může být zaset přímo, vyprázdnit materiál na část agaru a odtud odtud vybodkovat.

V případě použití obohacených vývarů projděte část seleničitého vývaru a zasejte drigalskou špachtlí.

Inkubujte při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobióze.

Je třeba vzít v úvahu, že počet gramů, které se mají zvážit, a konečné pH média se mohou u jednotlivých komerčních domů lišit. Střední základna vždy přináší indikace pro její přípravu.

Použití

Často se používá při analýze kultivace stolice a při mikrobiologickém studiu vzorků odpadních vod, pitné vody a potravin..

Často se připravují dvojité destičky, na jedné straně je umístěn agar Salmonella-Shigella a na druhé XLD agar.

Omezení

-Některé kmeny Shigella na tomto médiu nerostou. Proto se nedoporučuje pro primární izolaci tohoto rodu..

-Ne každá průhledná kolonie s černým středem svědčí o Salmonella; Pro správnou identifikaci je nutné provést biochemické testy, protože kolonie některých kmenů Proteus jsou k nerozeznání od kolonií Salmonella.

-O dehydratované médium je třeba se starat při expozici prostředí, protože je velmi hygroskopické. Proto musí být uchováván v suchém a dobře uzavřeném prostředí. Otevřeno na velmi krátkou dobu.

-V průběhu času se mohou žlučové soli v médiu vysrážet a vytvořit agarový obraz v agaru, ale to neovlivní výsledky..

-Některé kmeny Shigella mohou pomalu fermentovat laktózu.

QA

Aby bylo prokázáno, že médium funguje správně, je vhodné zasadit známé nebo certifikované kontrolní kmeny a sledovat, zda růst splňuje očekávané vlastnosti..

K tomu můžete použít kmeny E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium nebo Enterococcus faecalis.

Očekávané výsledky jsou:

Escherichia coli --růžové konvexní kolonie.

Enterobacter a Klebsiella- velké kolonie a červené nebo růžové mukoidy.

Shigella flexneri --čiré nebo bezbarvé ploché kolonie.

Salmonella typhimurium - bezbarvé kolonie s černým středem.

Enterococcus faecalis-- celková inhibice.

Reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Dostupné na: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Dostupné na: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  4. Diagnostika Valtek. Salmonella-Shigella agar (SS agar) .2010. K dispozici na: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře