The seleničitý vývar Je to selektivní kapalné kultivační médium. Byl navržen společností Leifson pro obohacení vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost enteropatogenních bakterií rodu Salmonella..
Toto médium splňuje požadavky Americké asociace pro veřejné zdraví (APHA), a proto je přijatelné pro vyšetřování přítomnosti salmonely ve vzorcích stolice, moči, tekutých nebo pevných potravin, vody a dalších..
Jeho chemické složení podporuje regeneraci těchto mikroorganismů a zase inhibuje růst ostatních. Je primárně toxický pro většinu bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae. Umožňuje však také obnovení kmenů Shigella a neinhibuje růst Pseudomonas a Proteus..
Skládá se z bezvodého hydrogénseleničitanu sodného, bezvodého fosforečnanu sodného, peptonů a laktózy. Existuje také varianta, do které se přidává cystin, proto jeho název selenit-cystinový bujón..
V současné době je upřednostňováno použití bujónu selenit-cystin, protože se získá vyšší procento výtěžku Salmonella, ekvivalentní tomu, které bylo pozorováno u jiných selektivních médií pro stejný účel, jako je bujón tetrathionát sodný..
Rejstřík článků
Peptony obsažené v bujónu slouží jako živiny pro správný vývoj mikroorganismů. Kmeny salmonely používají peptony jako zdroj dusíku, vitamínů a aminokyselin.
Laktóza je fermentovatelný sacharid, zatímco seleničitan sodný je inhibiční látka, která zastavuje růst grampozitivních bakterií a většiny bakterií přítomných ve střevní flóře, zejména těch z čeledi Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je pufr, který stabilizuje pH média.
V případě varianty seleničitého bujónu obsahující L-cystin je tato další sloučenina redukčním činidlem, které minimalizuje toxicitu seleničitanu a zvyšuje výtěžnost Salmonella..
Pokud máte složky směsi, můžete zvážit:
4 g bezvodého hydrogensleničitanu sodného.
10 g bezvodého fosforečnanu sodného.
5 gramů peptonů.
4 g laktózy.
Sloučeniny se rozpustí v 1 litru sterilní destilované vody. Může se mírně zahřát, aby se úplně rozpustil.
Některé laboratoře vystavují médium po dobu 10 minut v plynné fázi, aby jej sterilizovaly, protože by se neměl používat autokláv. Pokud je médium sterilizováno, může být až do použití skladováno v chladničce..
Může být také připraven nesterilní a podáván přímo 10 až 15 ml do sterilních zkumavek.
V takovém případě by měl být ponechán k odpočinku a okamžitě použit. Jelikož médium není sterilní, nelze jej skladovat v lednici pro pozdější použití..
Pokud je k dispozici komerční médium, zvažte 23 g dehydratovaného média a rozpusťte jej v jednom litru sterilní destilované vody. Krátce zahřejte až do konce rozpouštění. Neautoklávujte. Asepticky podávejte 10 nebo 15 ml ve sterilních zkumavkách.
Konečné pH média musí být 7,0 ± 0,2.
Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je světlý a průsvitný jantarový..
Obsahuje stejné sloučeniny jako seleničná půda, ale přidá se 10 mg cystinu. Zbytek postupu je přesně stejný, jak je popsáno výše.
Toto médium je speciální pro použití v epidemiologických studiích, v případech, kdy nemoc není v akutním stadiu, u asymptomatických pacientů nebo zdravých nosičů.
Izolace rodu Salmonella je obecně obtížná, protože se obvykle jedná pouze o vzorky slabě kontaminující. Protože je v malém množství, snadno se překrývá s růstem dalších bakteriálních rodů, které se nacházejí ve větším množství..
Na druhé straně jsou suroviny, ze kterých se zpracované potraviny vyrábějí, často vystaveny teplu, dehydratačním procesům, použití dezinfekčních prostředků, záření a konzervačních látek..
Salmonely přítomné v surovině jsou proto zneužívány podrobením produktu výše uvedeným průmyslovým procesům. Podobně v případě klinických vzorků, jako jsou výkaly, mohou být kmeny slabé, pokud pocházejí od pacientů léčených antibiotiky..
Proto by měl být jakýkoli vzorek, u kterého je podezření na přítomnost Salmonelly, předem obohacen v laktózovém bujónu a následně obohacen v seleničitém bujónu, aby se optimalizovala jeho výtěžnost v selektivních médiích, jako je SS agar, xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD), enterický Hektoenův agar (HE) a mimo jiné jasně zelený agar.
U vzorků stolice odeberte 1 g vzorku a suspendujte v zkumavce s 10 až 15 ml seleničitého bujónu. Pokud jsou stolice tekuté, vezměte 1 ml a suspendujte v bujónu. U rektálních výtěrů vypusťte materiál výtěru do bujónu.
Ve vzorcích pevných potravin vezměte 1 g a suspendujte v seleničitém bujónu.
V tekutých potravinách smíchejte ve stejných částech se selenitovým vývarem při dvojnásobné koncentraci.
U vzorků moči centrifugujte, vyhoďte supernatant, vezměte veškerý sediment a suspendujte ho v seleničitém bujónu..
Bujóny se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace. O bakteriálním růstu svědčí zákal. Pro inkubaci při 42 ° C lze také přidat další zkumavku na vzorek. Následně se naočkuje selektivní pevná média ze seleničitého bujónu.
Pro kontrolu sterility se seleničná půda z každé neinokulované dávky inkubuje 24 hodin při 37 ° C. Neočekává se žádný zákal ani změna barvy média..
K řízení správné funkce média lze použít známé kmeny, jako například:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.
Očekávané výsledky jsou:
Selenitové bujónové médium je toxické pro lidskou pokožku, proto je třeba se vyhnout přímému kontaktu..
Zatím žádné komentáře