Selenitový vývar, příprava a použití

2526
Robert Johnston

The seleničitý vývar Je to selektivní kapalné kultivační médium. Byl navržen společností Leifson pro obohacení vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost enteropatogenních bakterií rodu Salmonella..

Toto médium splňuje požadavky Americké asociace pro veřejné zdraví (APHA), a proto je přijatelné pro vyšetřování přítomnosti salmonely ve vzorcích stolice, moči, tekutých nebo pevných potravin, vody a dalších..

Selenitový vývar. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil

Jeho chemické složení podporuje regeneraci těchto mikroorganismů a zase inhibuje růst ostatních. Je primárně toxický pro většinu bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae. Umožňuje však také obnovení kmenů Shigella a neinhibuje růst Pseudomonas a Proteus..

Skládá se z bezvodého hydrogénseleničitanu sodného, ​​bezvodého fosforečnanu sodného, ​​peptonů a laktózy. Existuje také varianta, do které se přidává cystin, proto jeho název selenit-cystinový bujón..

V současné době je upřednostňováno použití bujónu selenit-cystin, protože se získá vyšší procento výtěžku Salmonella, ekvivalentní tomu, které bylo pozorováno u jiných selektivních médií pro stejný účel, jako je bujón tetrathionát sodný..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 - Selenitový vývar
    • 2.2 - Příprava komerčního prostředí
    • 2.3 Varianta bujónu selenit-cystin
  • 3 použití
  • 4 zaseto
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Omezení
  • 7 Reference

Základ

Peptony obsažené v bujónu slouží jako živiny pro správný vývoj mikroorganismů. Kmeny salmonely používají peptony jako zdroj dusíku, vitamínů a aminokyselin.

Laktóza je fermentovatelný sacharid, zatímco seleničitan sodný je inhibiční látka, která zastavuje růst grampozitivních bakterií a většiny bakterií přítomných ve střevní flóře, zejména těch z čeledi Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je pufr, který stabilizuje pH média.

V případě varianty seleničitého bujónu obsahující L-cystin je tato další sloučenina redukčním činidlem, které minimalizuje toxicitu seleničitanu a zvyšuje výtěžnost Salmonella..

Příprava

-Selenitový vývar

Pokud máte složky směsi, můžete zvážit:

4 g bezvodého hydrogensleničitanu sodného.

10 g bezvodého fosforečnanu sodného.

5 gramů peptonů.

4 g laktózy.

Sloučeniny se rozpustí v 1 litru sterilní destilované vody. Může se mírně zahřát, aby se úplně rozpustil.

Některé laboratoře vystavují médium po dobu 10 minut v plynné fázi, aby jej sterilizovaly, protože by se neměl používat autokláv. Pokud je médium sterilizováno, může být až do použití skladováno v chladničce..

Může být také připraven nesterilní a podáván přímo 10 až 15 ml do sterilních zkumavek.

V takovém případě by měl být ponechán k odpočinku a okamžitě použit. Jelikož médium není sterilní, nelze jej skladovat v lednici pro pozdější použití..

-Příprava komerčního média

Pokud je k dispozici komerční médium, zvažte 23 g dehydratovaného média a rozpusťte jej v jednom litru sterilní destilované vody. Krátce zahřejte až do konce rozpouštění. Neautoklávujte. Asepticky podávejte 10 nebo 15 ml ve sterilních zkumavkách.

Konečné pH média musí být 7,0 ± 0,2.

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je světlý a průsvitný jantarový..

Varianta bujónu selenit-cystin

Obsahuje stejné sloučeniny jako seleničná půda, ale přidá se 10 mg cystinu. Zbytek postupu je přesně stejný, jak je popsáno výše.

Aplikace

Toto médium je speciální pro použití v epidemiologických studiích, v případech, kdy nemoc není v akutním stadiu, u asymptomatických pacientů nebo zdravých nosičů.

Izolace rodu Salmonella je obecně obtížná, protože se obvykle jedná pouze o vzorky slabě kontaminující. Protože je v malém množství, snadno se překrývá s růstem dalších bakteriálních rodů, které se nacházejí ve větším množství..

Na druhé straně jsou suroviny, ze kterých se zpracované potraviny vyrábějí, často vystaveny teplu, dehydratačním procesům, použití dezinfekčních prostředků, záření a konzervačních látek..

Salmonely přítomné v surovině jsou proto zneužívány podrobením produktu výše uvedeným průmyslovým procesům. Podobně v případě klinických vzorků, jako jsou výkaly, mohou být kmeny slabé, pokud pocházejí od pacientů léčených antibiotiky..

Proto by měl být jakýkoli vzorek, u kterého je podezření na přítomnost Salmonelly, předem obohacen v laktózovém bujónu a následně obohacen v seleničitém bujónu, aby se optimalizovala jeho výtěžnost v selektivních médiích, jako je SS agar, xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD), enterický Hektoenův agar (HE) a mimo jiné jasně zelený agar.

Zaseto

U vzorků stolice odeberte 1 g vzorku a suspendujte v zkumavce s 10 až 15 ml seleničitého bujónu. Pokud jsou stolice tekuté, vezměte 1 ml a suspendujte v bujónu. U rektálních výtěrů vypusťte materiál výtěru do bujónu.

Ve vzorcích pevných potravin vezměte 1 g a suspendujte v seleničitém bujónu.

V tekutých potravinách smíchejte ve stejných částech se selenitovým vývarem při dvojnásobné koncentraci.

U vzorků moči centrifugujte, vyhoďte supernatant, vezměte veškerý sediment a suspendujte ho v seleničitém bujónu..

Bujóny se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace. O bakteriálním růstu svědčí zákal. Pro inkubaci při 42 ° C lze také přidat další zkumavku na vzorek. Následně se naočkuje selektivní pevná média ze seleničitého bujónu.

QA

Pro kontrolu sterility se seleničná půda z každé neinokulované dávky inkubuje 24 hodin při 37 ° C. Neočekává se žádný zákal ani změna barvy média..

K řízení správné funkce média lze použít známé kmeny, jako například:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekávané výsledky jsou:

  • Růst musí být uspokojivý pro první tři bakteriální kmeny.
  • V následujících situacích Escherichia coli částečná inhibice.
  • Pro Proteus mírný růst.

Omezení

Selenitové bujónové médium je toxické pro lidskou pokožku, proto je třeba se vyhnout přímému kontaktu..

Reference

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Srovnání mezi seleničitanem sodným a tetrathionátovým kultivačním médiem, oba inkubovány při 37 ° C a 42 ° C pro izolaci Salmonella spp z výkalů nosičů. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Britannia Laboratories. Selenito Broth. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Selenitový vývar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologická izolace Salmonella spp. a molekulární nástroje pro jeho detekci. Zdraví, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Dostupné z: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře