The thioglykolátový vývar Jedná se o obohacené kultivační médium s tekutou konzistencí. Je známá pod zkratkou FTM pro svou zkratku v anglickém tekutém thioglykolátovém médiu. Byl vytvořen Brewerem a upraven v roce 1944 Věrou, která přidala kaseinový pepton.
Toto médium má nízký oxidačně-redukční potenciál, proto se nedoporučuje pro vývoj přísných aerobních bakterií, ale je ideální pro regeneraci fakultativně aerobních, přísně anaerobních a nenáročných mikroaerofilních bakterií..
Vysoký výkon pozorovaný u tohoto média při izolaci a regeneraci nejrůznějších mikroorganismů jej učinil přijat americkým lékopisem (USP), oficiální asociací zemědělských chemiků (AOAC) a Evropským lékopisem (EP).
Tyto organizace ji doporučují pro testování kontroly sterility farmaceutických produktů a pro obohacování různých typů vzorků..
Thioglykolát cado se skládá z kvasnicového extraktu, pankreatického trávení kaseinu, bezvodé dextrózy, L-cystinu, chloridu sodného, thioglykolátu sodného, resazurinu a agaru v malém množství.
Existuje několik verzí tohoto média, mezi nimi jsou: thioglykolátový bujón s indikátorem, thioglykolátový bujón bez indikátoru, thioglykolátový bujón s indikátorem obohaceným heminem a vitaminem K1, a thioglykolátový vývar z uhličitanu vápenatého.
Je třeba poznamenat, že varianta thioglykolátového bujónu obohacená heminem a vitaminem K slouží ke zvýšení růstu náročných anaerobů a varianta thioglykolátového bujónu obsahující uhličitan vápenatý je užitečná pro potlačení kyselin produkovaných během mikrobiálního růstu..
Rejstřík článků
Thioglykolátový bujón je považován za neselektivní obohacovací médium, protože umožňuje růst většiny nenáročných bakterií. Nutriční požadavky zajišťují kvasnicový extrakt, pankreatický digest a glukóza.
Na druhou stranu toto médium, přestože je to vývar, obsahuje malé množství agaru; To znamená, že má nízký oxidačně-redukční potenciál, protože zpomaluje vstup kyslíku, a to takovým způsobem, že kyslík klesá, jak se dostává hlouběji do trubice..
Proto je toto médium ideální pro vývoj fakultativně aerobních, mikroaerofilních a přísně anaerobních bakterií, přičemž druhé médium není nutné za těchto podmínek inkubovat. Stejné médium reguluje množství kyslíku v médiu, chybí na dně zkumavky a v dostatečném množství na povrchu..
Podobně působí thioglykolát a L-cystin jako redukční činidla a pomáhají předcházet hromadění látek, které jsou škodlivé pro vývoj bakterií, jako je peroxid. Kromě toho tyto sloučeniny obsahují sulfhydrylové skupiny (-SH-), které kromě jiných těžkých kovů neutralizují inhibiční účinky derivátů rtuti, arsenu..
Resazurin je indikátorem redukce oxidů. Tato látka je při redukci bezbarvá a při oxidaci růžová. Existují varianty indikátorového a neindikátorového thioglykolátového bujónu. Jeho použití bude záviset na typu vzorku a preferencích laboratoře..
Mezitím chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu thioglykolátového bujónu a použití glukózy v bezvodé formě zabraňuje nadměrné vlhkosti v dehydratovaném médiu..
Naváží se 29,75 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se nechá stát přibližně 5 minut. Přiveďte ke zdroji tepla a často protřepávejte, dokud se úplně nerozpustí..
Nalijte médium do zkumavek a autoklávujte 15 minut při 121 ° C. Před použitím nechte vychladnout. Zkontrolujte, zda je vložka obchodního domu zachována. Někteří doporučují skladovat při pokojové teplotě na tmavém místě a jiní v chladničce chráněné před světlem.
PH připraveného média je 7,1 ± 0,2.
Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je světle jantarové s trochou opalescence..
Existují komerční prostředky, které již přinášejí hemin a vitamin K.1, speciální pro pěstování anaerobů.
Pokud není obohacené anaerobní médium k dispozici, lze připravit základní thioglykolátový bujón. K tomu se přidá 10 mg hydrochloridu heminu a 1 mg vitaminu K.1 za každý litr média. Pokud se však do thioglykolátového bujónu přidá krev nebo sérum, přidání heminu nebo vitaminu K není nutné..
Dodává se komerčně a je připraven podle pokynů na vložce.
Má stejné složení jako základní thioglykolát, ale neobsahuje resazurin.
Naváží se 30 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Zbytek přípravku je stejný jako přípravek popsaný v thioglykolátovém bujónu s indikátorem.
Thioglykolátový bujón je vhodný pro obohacení klinických vzorků, zejména těch ze sterilních míst. Je také užitečné pro neklinické vzorky, jako jsou kosmetika, léky atd..
Pro naočkování kapalných vzorků (jako je CSF, mimo jiné synoviální tekutina) se vzorky nejdříve odstředí a poté se odeberou 2 kapky sedimentu a umístí se do thioglykolátového bujónu. Inkubujte 24 hodin při 35 ° C. Pokud během této doby nedojde k růstu (zákal), inkubujte maximálně 7 dní.
Pokud je vzorek odebrán tamponem, kultivační médium se nejprve naočkuje na destičky a nakonec se tampon zavede do bujónu, vyčnívající část se rozdělí a zkumavka se uzavře, přičemž tampon zůstane uvnitř. Inkubujte při 35 ° C po dobu 24 hodin, maximálně 7 dní.
U pevných vzorků homogenizujte ve fyziologickém solném roztoku (SSF) a poté naočkujte thioglykolátový bujón 2 kapkami suspenze..
Někdy jej lze použít jako transportní médium pro vzorky, u nichž existuje podezření na přítomnost přísných anaerobů, nebo jako záložní obohacovací půda..
Varianta thioglykolátového bujónu s uhličitanem vápenatým se používá k udržení kontrolních kmenů po delší dobu, protože má schopnost neutralizovat kyseliny produkované použitím glukózy; tyto kyseliny jsou toxické pro určité bakterie.
Růst v thioglykolátové půdě bude pozorován zákalem média. Doporučuje se provést Gramovo barvení a následně subkultivovat v neselektivním a selektivním médiu, v závislosti na typu vzorku a podezřelých mikroorganismech..
Pro kontrolu sterility se doporučuje inkubovat jeden nebo dva bujóny bez naočkování. Očekávaným výsledkem je čirý vývar, beze změny barvy, i když je normální vidět na povrchu tuby mírně růžovou barvu..
Pro kontrolu kvality by mělo být naočkováno 10 - 100 CFU certifikovaných kontrolních kmenů, jako např Zlatý stafylokok ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
Inkubujte při 30–35 ° C na aerobióze po dobu 24 hodin, maximálně 3 dny, protože tyto mikroorganismy rychle rostou.
Dobrý vývoj se očekává ve všech případech, s výjimkou Micrococcus luteus Y Bacillus subtilis, kde může dojít k mírnému vývoji.
Pro kontrolu kvality thioglykolátového bujónu obohaceného o hemin a vitamin K.1, lze použít kontrolní kmeny Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 a Bacteroides fragilis ATCC 25285. Očekávaným výsledkem je uspokojivý růst.
-Někdy lze vidět, že povrch indikátorového thioglykolátového bujónu zčervená; To je způsobeno oxidací média. Pokud růžová barva pokrývá 30% nebo více celkového bujónu, může být zahřívána ve vodní lázni po dobu 5 minut, znovu ochlazena a použita..
Tím odstraníte absorbovaný kyslík a vrátíte médium do původní barvy. Tento postup lze provést pouze jednou.
-Pro zlepšení růstu aerobních bakterií by měl být inkubován s víčkem mírně uvolněným. Pro správný vývoj přísných aerobů je však pro tento účel výhodné použít infuzní bujón do mozku nebo sójový bujón tryptikázy..
-Je třeba zabránit zamrznutí média nebo přehřátí, protože obě podmínky médium poškodí..
-Přímé světlo poškozuje kultivační médium, musí být skladováno chráněné před světlem.
Zatím žádné komentáře