The nefelometrie spočívá v měření záření způsobeného částicemi (v roztoku nebo v suspenzi), čímž se měří výkon rozptýleného záření v jiném úhlu, než je směr dopadajícího záření.
Když je na suspendovanou částici zasažen paprsek světla, je zde část světla, která se odráží, další část je absorbována, další je vychýlena a zbytek je přenášen. To je důvod, proč když světlo zasáhne průhledné médium, ve kterém je suspenze pevných částic, suspenze se jeví zakalená..
Rejstřík článků
V okamžiku, kdy paprsek světla narazí na částice suspendované látky, změní směr šíření paprsku svůj směr. Tento efekt závisí na následujících aspektech:
1. Rozměry částice (velikost a tvar).
2. Vlastnosti suspenze (koncentrace).
3. Vlnová délka a intenzita světla.
4. Vzdálenost dopadajícího světla.
5. detekční úhel.
6. Index lomu média.
Nefelometr je přístroj používaný k měření suspendovaných částic v kapalném vzorku nebo v plynu. Fotobuňka umístěná v úhlu 90 ° ke světelnému zdroji tedy detekuje záření z částic přítomných v suspenzi..
Rovněž světlo odražené částicemi směrem k fotobuňce závisí na hustotě částic. Diagram 1 představuje základní komponenty, které tvoří nefelometr:
V nefelometrii je životně důležité mít zdroj záření s vysokým světelným výkonem. Existují různé typy, mimo jiné xenonové výbojky a rtuťové výbojky, halogenové žárovky wolframu, laserové záření a další..
Tento systém je umístěn mezi zdrojem záření a kyvetou, takže na kyvetě je tímto způsobem zabráněno záření s různými vlnovými délkami ve srovnání s požadovaným zářením..
Jinak by fluorescenční reakce nebo zahřívací účinky v roztoku způsobovaly odchylky od měření..
Je to obecně hranolová nebo válcová nádoba a může mít různé velikosti. V tomto najdete studované řešení.
Detektor je umístěn ve specifické vzdálenosti (obecně velmi blízko kyvety) a je zodpovědný za detekci záření rozptýleného částicemi v suspenzi..
Obecně se jedná o elektronický stroj, který přijímá, převádí a zpracovává data, což jsou v tomto případě měření získaná z provedené studie..
Každé měření podléhá procentu chyby, která je dána hlavně:
Znečištěné kyvety: v kyvetách jakýkoli prostředek mimo zkoumaný roztok, ať už uvnitř nebo vně kyvety, snižuje zářivé světlo na cestě k detektoru (vadné kyvety, prach ulpívající na stěnách kyvety).
Rušení: přítomnost nějakého mikrobiálního znečištění nebo zákalu rozptýlí sálavou energii a zvyšuje intenzitu disperze.
Fluorescenční sloučeniny: to jsou ty sloučeniny, které při excitaci dopadajícím zářením způsobují chybné a vysoké hodnoty hustoty rozptylu.
Skladování činidel: nesprávná teplota systému může způsobit nepříznivé podmínky studie a podněcovat přítomnost zakalených nebo vysrážených činidel.
Kolísání elektrické energie: Aby se zabránilo tomu, že dopadající záření bude zdrojem chyb, pro rovnoměrné záření se doporučují stabilizátory napětí.
Protože vyzařovaný výkon detekovaného záření je přímo úměrný hmotnostní koncentraci částic, mají nefelometrické studie - teoreticky - vyšší metrologickou citlivost než jiné podobné metody (jako je turbidimetrie).
Kromě toho tato technika vyžaduje zředěná řešení. To umožňuje minimalizovat absorpční i reflexní jevy..
Nefelometrické studie zaujímají v klinických laboratořích velmi důležité postavení. Aplikace sahají od stanovení imunoglobulinů a proteinů akutní fáze, komplementu a koagulace.
Pokud biologický vzorek obsahuje požadovaný antigen, je smíchán (v pufrovacím roztoku) s protilátkou za vzniku imunitního komplexu..
Nefelometrie měří množství světla, které je rozptýleno reakcí antigen-protilátka (Ag-Ac), a tímto způsobem jsou detekovány imunokomplexy.
Tuto studii lze provést dvěma metodami:
Tuto techniku lze použít pro analýzu koncových bodů, ve které se protilátka studovaného biologického vzorku inkubuje po dobu dvaceti čtyř hodin..
Komplex Ag-Ac se měří pomocí nefelometru a množství rozptýleného světla se porovnává se stejným měřením prováděným před vytvořením komplexu..
U této metody je kontinuálně sledována rychlost tvorby komplexu. Reakční rychlost závisí na koncentraci antigenu ve vzorku. Zde se měření provádějí jako funkce času, takže první měření se provádí v čase „nula“ (t = 0).
Kinetická nefelometrie je nejpoužívanější technikou, protože studie může být provedena za 1 hodinu ve srovnání s dlouhou dobou metody koncového bodu. Disperzní poměr se měří těsně po přidání činidla.
Proto, pokud je činidlo konstantní, je množství přítomného antigenu považováno za přímo úměrné rychlosti změny.
Nefelometrie se obecně používá při analýze chemické kvality vody, ke stanovení jasnosti a ke kontrole jejích procesů čištění..
Používá se také k měření znečištění ovzduší, při kterém se koncentrace částic určuje z disperze, kterou produkují v dopadajícím světle..
Zatím žádné komentáře