The Benediktovo činidlo je modravý roztok mědi, který se používá k detekci přítomnosti redukujících cukrů: aldehydů, alfa-hydroxyketonů a polotovarů. Byl vyvinut Stanleyem R. Benedictem (1884-1936).
Alfa-hydroxy-ketonové cukry se vyznačují tím, že mají hydroxylovou skupinu v blízkosti ketonu. Mezitím je hemiketal sloučenina, která je výsledkem přidání alkoholu k aldehydu nebo ketonu. Benediktovo činidlo reaguje bez rozdílu se všemi těmito redukujícími cukry.
Benediktova metoda je založena na redukčním působení cukrů na Cudva+, modrého zbarvení, které ji transformuje na Cu+. UK+ tvoří cihlově červenou sraženinu oxidu měďného. V závislosti na koncentraci cukrů se však objeví spektrum barev (horní obrázek).
Všimněte si, že pokud je Benediktovo činidlo přidáno do zkumavky bez redukce cukrů (0%), nepodléhá žádné změně ve své modravé barvě. Když je tedy koncentrace vyšší než 4%, je zkumavka zbarvena do hnědé barvy..
Rejstřík článků
Činidlo vytvořil americký chemik Stanley Rossiter Benedict v roce 1909, který publikoval svou vědeckou práci Činidlo pro detekci redukujících cukrů, v časopise J. Biol. Chem.
Dále Lewis a Benedict (1915) publikovali metodu pro stanovení redukce cukrů v krvi, přičemž jako indikátor použili pikrát; ale přestal být používán kvůli nedostatečné přesnosti.
Benediktovo činidlo je velmi podobné Fehlingově. Liší se tím, že Benedikt používá citrátový ion a uhličitan sodný; zatímco Fehling používá tartrátový iont a hydroxid sodný.
Benediktův test je kvalitativní, to znamená, že detekuje pouze přítomnost redukujících cukrů. Benediktovo činidlo však může být kvantitativní, pokud má v roztoku thiokyanát draselný, který tvoří bílou sraženinu thiokyanátu měďnatého, kterou lze titrovat pomocí standardů glukózy..
Benediktovo činidlo se stále používá k detekci přítomnosti glukózy v moči a je indikátorem cukrovky u pacienta, jehož moč je podrobena Benediktovu testu nebo testu. Nelze však vyloučit, že glukosurie má jiný původ.
Například zvýšená glykosurie se vyskytuje v podmínkách, jako je: těhotenství, primární renální glykosurie, renální tubulární acidóza, primární nebo sekundární Fanconiho syndrom, hyperaldosteronismus a akutní pankreatitida nebo rakovina pankreatu..
Benediktovo činidlo je modré kvůli přítomnosti Cudva+, který se redukuje na Cu+ působením snižování cukrů; v tomto případě glukóza, tvořící cihlově červenou sraženinu oxidu měďného.
Zbarvení a tvorba sraženiny v Benediktově testu aplikovaném na moč se liší v závislosti na koncentraci redukujícího cukru. Pokud je koncentrace glukózy v moči nižší než 500 mg / dl, roztok zezelená a nedochází k tvorbě sraženiny.
Koncentrace glukózy v moči 500 - 1 000 mg / dL způsobí v Benediktově testu zelenou sraženinu. Při koncentraci vyšší než 1 000 až 1 500 mg / dL způsobuje tvorbu žluté sraženiny.
Pokud je koncentrace glukózy 1 500 - 2 000 mg / dL, objeví se oranžová sraženina. Nakonec je koncentrace glukózy v moči vyšší než 2 000 mg / dL, což způsobí tvorbu cihlově červené sraženiny..
To naznačuje, že Benediktův test má semikvantitativní charakter a výsledek je hlášen pomocí křížků. Tedy například tvorba zelené sraženiny odpovídá křížku (+); a tvorba cihlově červené sraženiny, odpovídá čtyřem křížům (++++).
Benediktovo činidlo detekuje přítomnost redukujících cukrů, které mají volnou funkční skupinu nebo volnou ketonovou funkční skupinu, jako součást své molekulární struktury. To je případ glukózy, galaktózy, manózy a fruktózy (monosacharidy), jakož i laktózy a maltózy (disacharidy).
Sacharóza a škrob nereagují s Benediktovým činidlem, protože mají volné redukční skupiny. Kromě toho existují sloučeniny, které interferují s Benediktovým testem v moči a dávají falešnou pozitivitu; to je případ salicylátu, penicilinu, streptomycinu, levodopy, kyseliny nalidixové a isoniazidu.
V moči jsou přítomny chemikálie, které mohou snížit Benediktovu reakci; například: kreatinin, urát a kyselina askorbová.
Složky Benedictova činidla jsou následující: pentahydrát síranu měďnatého, uhličitan sodný, citrát trisodný a destilovaná voda..
Síran měďnatý pentahydrát, CuSO45HdvaO, obsahuje Cudva+: je sloučenina, která dává Benediktovu činidlu modrou barvu. Redukující cukry působí na Cudva+, produkující jeho redukci na Cu+ a tvorba sraženiny oxidu měďného (CudvaO) cihlově červená.
Uhličitan sodný vytváří zásadité médium, které je nezbytné pro redukci mědi. Uhličitan sodný reaguje s vodou za vzniku hydrogenuhličitanu sodného a hydroxylového iontu, OH-, zodpovědný za zásaditost média nezbytného pro redukční proces.
Citrát sodný tvoří komplex s mědí (II), který mu brání podstoupit redukci na Cu (I) během skladování.
5 ml Benedictova činidla se vloží do zkumavky o rozměrech 20 x 160 mm a přidá se do ní 8 kapek moči. Zkumavka se jemně protřepe a umístí na 5 až 10 minut do nádoby s vroucí vodou..
Po uplynutí této doby je trubice vyjmuta z horké vodní lázně a její povrch je ochlazen tekoucí vodou, aby byl konečně získán výsledek získaný při provádění Benediktova testu (barvy).
Snížení obsahu Cu (II) během Benediktova testu lze popsat následovně:
RCHO + 2 Cudva+ (v komplexu) + 5 OH- => RCOO- + CudvaO + 3 HdvaNEBO
RCHO = aldehyd; RCOO- = (karboxylátový ion); CudvaO = oxid měďný, cihlově červená sraženina.
Odváží se 173 g citrátu sodného a 100 g uhličitanu sodného a rozpustí se společně v 800 ml teplé destilované vody. Pokud jsou pozorovány stopy nerozpuštěných látek, musí být roztok přefiltrován.
Na druhé straně se 17,3 g pentahydrátu síranu měďnatého rozpustí ve 100 ml destilované vody..
Následně se oba vodné roztoky jemně promíchají a pokračují za stálého míchání, přičemž se doplní destilovanou vodou na objem 1 000 ml..
Zatím žádné komentáře