Baird Parkerův agarový základ, příprava a použití

2662
Anthony Golden

The Baird Parkerův agar Je to pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. Byl vytvořen v roce 1962 pro detekci a počítání stafylokoků pozitivních na koagulázu (Zlatý stafylokok).

Skládá se z hydrolyzátu pankreatického kaseinu, masového extraktu, kvasnicového extraktu, chloridu lithného, ​​glycinu, pyruvátu sodného, ​​teluritu draselného, ​​agaru a emulze vaječného žloutku..

Typické kolonie Staphylococcus aureus na agaru Baird Parker. Zdroj: Daizy John [CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0)]

Baird Parker Agar je založen na schopnostech S. aureus ke snížení teluritu a produkci lecitinázy. Obě vlastnosti generují kolonii se specifickými vlastnostmi pro tento druh. Proto je vysoce účinný při detekci tohoto mikroorganismu..

Typické kolonie S. aureus Jsou černé nebo tmavě šedé, s bezbarvým okrajem a světlou halo, která je obklopuje, odlišující je od ostatních mikroorganismů. Tento patogen lze nalézt v klinických vzorcích, vodách, kosmetice a syrových nebo vařených potravinách..

Jeho diagnóza nebo detekce je nanejvýš důležitá, a to kvůli různým patologiím, které produkuje, jako je otrava jídlem, syndrom opařené kůže, syndrom toxického šoku, abscesy, meningitida, septikémie, endokarditida..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Nutriční síla
    • 1.2 Selektivní
    • 1.3 Diferenciál
  • 2 Příprava
    • 2.1 Emulace vaječného žloutku
    • 2.2 Tellurit draselný 1% w / v
    • 2.3 Příprava kultivačního média
  • 3 Použijte
    • 3.1 Klinické vzorky
    • 3.2 Vzorky potravin
    • 3.3 Vzorky vody
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 doporučení
  • 6 Reference

Základ

Výživná síla

Pankreatický hydrolyzát kaseinu, masový extrakt a kvasnicový extrakt jsou zdrojem živin, vitamínů a minerálů nezbytných pro obecný mikrobiální vývoj, zatímco pyruvát a glycin jsou sloučeniny, které podporují specifický růst Zlatý stafylokok.

Selektivní

Baird Parker Agar je selektivní, protože obsahuje látky, které inhibují růst doprovodné flóry a podporují rozvoj S. aureus. Inhibičními sloučeninami jsou chlorid lithný a telurit draselný..

Rozdíl

Toto médium umožňuje rozlišovat S. aureus zbytku koagulázy negativních stafylokoků. S. aureus má schopnost redukovat telurit na volné kovové černé telur, tvořící černé nebo tmavě šedé kolonie.

Podobně vaječný žloutek poskytuje substráty k prokázání přítomnosti enzymu lecitinázy a lipázy.. S. aureus je lecitináza pozitivní, a proto bude kolem kolonie pozorován jasný halo, což naznačuje, že lecitin byl hydrolyzován.

V tomto smyslu vzhled na tomto agaru lesklých černých nebo tmavě šedých kolonií se světelnou halo kolem nich naznačuje přítomnost S. aureus. 

Pokud se vytvoří srážková zóna, je to známkou aktivity lipázy. Některé kmeny S. aureus jsou pozitivní na lipázu a jiné negativní.

V případě, že S. aureus Pokud je lipáza pozitivní, bude pozorována neprůhledná oblast kolem černé nebo tmavě šedé kolonie a poté lehká halo kvůli působení lecitinázy.

Kolonie bakterií jiných než S. aureus schopné růstu v tomto médiu vyvine bezbarvé nebo hnědé kolonie bez okolní halo.

Atypické černé kolonie lze vidět také s bezbarvým okrajem nebo bez něj, ale bez světelné halo. Tyto kolonie by neměly být brány v úvahu, neodpovídají S. aureus.

Příprava

Emulze vaječného žloutku

Vezměte čerstvé kuřecí vejce, dobře je umyjte a vložte na 2 až 3 hodiny do 70% alkoholu. Vejce se poté asepticky otevře a bílý se opatrně oddělí od žloutku. Poté se odebere 50 ml žloutku a smísí se s 50 ml sterilního fyziologického roztoku..

Tellurit draselný 1% w / v

Některé komerční domy prodávají 1% teluritu draselného připraveného k použití. Přidá se do média před tím, než médium ztuhne.

Pro přípravu tohoto roztoku v laboratoři se naváží 1,0 g teluritu draselného a rozpustí se v jedné části vody. Poté je množství vody dokončeno až do dosažení 100 ml. Roztok musí být sterilizován filtrační metodou.

Příprava kultivačního média

Naváží se 60 g dehydratovaného média a rozpustí se v 940 ml destilované vody. Směs necháme asi 5 až 10 minut odpočívat.

Pro zlepšení procesu rozpouštění aplikujte teplo častým mícháním média. Přiveďte na minutu k varu. Sterilizujte v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut.

Nechejte stát, dokud nedosáhne teploty 45 ° C, a přidejte 50 ml vaječné žloutkové emulze a 10 ml 1% teluritu. Dobře promíchejte a nalijte 15-20 ml na sterilní Petriho misky..

Nechte ztuhnout, převraťte do kbelíků a až do použití skladujte v chladničce.

Konečné pH připraveného média musí být 6,8 ± 0,2.

Před naočkováním vzorku počkejte, až destička dosáhne pokojové teploty. Vysejte desky šňůrou nebo výsevem na povrch pomocí špachtle Drigalski.

Barva dehydratovaného média je světle opálená a barva připraveného média je světle jantarová.

Použití

Klinické vzorky

Klinické vzorky se vysévají přímo vypouštěním části materiálu na jeden konec destičky a odtamtud se vysychá. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C.

Vzorky potravin

Naváží se 10 g vzorku jídla a homogenizuje se v 90 ml 0,1% peptonové vody, odtud se v případě potřeby připraví ředění. Naočkujte destičky trojmo 0,3 ml připravených roztoků a naočkujte na povrch pomocí špachtle Drigalski. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C.

Tato metodika umožňuje spočítat získané typické kolonie a je ideální, pokud je přítomna S. aureus nad 10 CFU na gr / ml vzorku.

Pokud je částka S. aureus Je malý nebo je zde spousta doprovodné flóry, doporučuje se obohatit vzorek v sójovém bujónu tryptikázou o 10% NaCl a 1% pyruvát sodný. To zvýhodní růst S. aureus a bude brzdit vývoj doprovodné flóry. Zakalené zkumavky se naočkují na agar Baird Parker..

Vzorky vody

Ve sterilizovaném vakuovém filtračním systému se filtruje 100 ml studované vody a následně se mikropórovitá membrána 0,4 mikronů odstraní sterilními kleštěmi a umístí na desku Baird Parker. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C. Tato technika umožňuje počítání typických kolonií S. aureus.

QA

Známé kmeny lze použít k hodnocení kvality agaru Baird Parker, jako např Zlatý stafylokok ATCC 25923, Zlatý stafylokok ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

V případě kmenů S. aureus Je známo, že ATCC redukuje telurit a jsou pozitivní na lipázu a lecitinázu. Musí tedy docházet k uspokojivému vývoji a růstu konvexních kolonií s černým středem a bezbarvým okrajem, s neprůhlednou halo a lehkou vnější halo..

Pokud jde o jeho část, S. epidermidis na tomto médiu se očekává špatný vývoj, s hnědošedými až černými koloniemi, bez světlé halo.

V následujících situacích E-coli Y P. mirabilis očekává se úplná nebo částečná inhibice. V případě růstu se hnědé kolonie vyvinou bez neprůhledné oblasti nebo světlé halo.

doporučení

-Po přidání teluritu a vaječného žloutku by se médium nemělo zahřívat.

-Příprava emulze vaječného žloutku a její přidání ve středu je velmi zranitelným krokem kontaminace. Musíte být opatrní.

-Pokud existují typické kolonie S. aureus musí být potvrzeno provedením koagulázového testu na uvedeném kmeni.

-Pokud existují pochybné výsledky s koagulázou, je třeba provést další potvrzující testy.

-Dávejte pozor, abyste nezaměňovali přítomnost typických kolonií S. aureus s atypickými černými koloniemi.

Reference

  1. Přispěvatelé z Wikipedie. Baird-Parkerův agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. března 2017, 19:36 UTC. K dispozici na: wikipedia.org/ Přístup k 18. únoru 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Dostupné na: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Baird Parkerova agarová základna. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  4. Laboratoře Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. K dispozici na: http://f-soria.es/Inform
  5. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Přeprava Zlatý stafylokok enterotoxigenní typ A, ve výtěrech z nosohltanu u osob manipulujících s potravinami. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Jídlo. Izolace a počítání Zlatý stafylokok. K dispozici v:sencamer.gob.ve

Zatím žádné komentáře