Czapekův agarový základ, příprava, použití a omezení

5197
Anthony Golden

The Czapkův agar (CZA) je selektivní pevné kultivační médium speciálně určené pro kultivaci saprofytických bakterií a hub. Vytvořili jej botanik Friedrich Johann Franz Czapek polského původu a americký chemik Arthur Wayland Dox; Z tohoto důvodu je tento agar také známý jako médium Czapek-Dox..

Původní médium bylo kapalné, ale později se přidal agar, aby se z něj stalo pevné médium. Czapekovo médium se skládá z dusičnanu sodného, ​​fosforečnanu bipraselného, ​​síranu hořečnatého, chloridu draselného, ​​síranu železnatého, sacharózy, agaru a destilované vody..

Czapekův agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Zdroj: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0))/ B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH Czapekova agaru je 7,3, ale existuje varianta, do které se přidá 10% kyselina mléčná, jejíž pH zůstává na 3,5. Toto kyselé médium se používá pro kultivaci acidofilních mikroorganismů.

Na druhé straně některé komerční domy upravily složení Czapekova agaru změnou síranu hořečnatého a fosforečnanu dvojsodného pomocí glycerofosfátu; tato modifikace brání tvorbě sraženiny fosforečnanu hořečnatého pozorované u konvenčního vzorce. Podobně existuje další varianta, do které se přidává kvasničný extrakt.

Nakonec je Czapekův agar doporučen Americkou asociací veřejného zdraví APHA pro studium Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Tyto druhy se vyznačují tím, že jsou environmentálními mikroorganismy a oportunistickými patogeny..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Střední Czapek-Dox
    • 2.2 Czapekovo médium při kyselém pH
    • 2.3 Upravené médium Czapek
    • 2.4 Czapekovo-kvasinkové médium
  • 3 Použijte
    • 3.1 Výsev
    • 3.2 Teplota a inkubační doba
    • 3.3 Charakteristiky některých kolonií na tomto médiu
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Toto médium obsahuje sacharózu; Tento sacharid slouží jako zdroj uhlíku, zatímco dusičnan sodný je zdrojem dusíku, ale na rozdíl od jiných médií je dodaný dusík anorganický..

Z tohoto důvodu je médium Czapek považováno za selektivní, protože mohou růst pouze mikroorganismy schopné používat anorganické sloučeniny jako jediný zdroj dusíku..

Jako regulátor osmolarity média je fosforečnan bipraselný. Síran hořečnatý, chlorid draselný a síran železnatý poskytují základní minerály pro růst saprofytických (volně žijících) mikroorganismů. S tímto vzorcem se vytvoří sraženina fosforečnanu hořečnatého.

Nakonec agar-agar je sloučenina, která poskytuje médiu tuhou konzistenci a voda je rozpouštědlem pro všechny složky..

S upravenou Czapekovou agarovou formulací nedochází k tvorbě sraženin a zlepšuje růstový výkon některých hub.

Extrémní kyselost agaru Acid Czapek Agar z něj činí selektivnější médium, které umožňuje pouze růst acidofilních mikroorganismů schopných využívat anorganický dusík. Zatímco kvasnicový agar Czapek zlepšuje výkon některých hub.

Příprava

Střední Czapek-Dox

Naváží se 49 g dehydratovaného kultivačního média a rozpustí se v destilované vodě. Aplikujte teplo až do varu. Směs často protřepejte, dokud se úplně nerozpustí..

-Czapekovy agarové klíny

Rozpuštěná směs se distribuuje do zkumavek a 15 minut se autoklávuje při 121 ° C. Při vyjímání z autoklávu před položením zkumavek homogenizujte a nechte ztuhnout.

-Czapkovy agarové desky

Rozpuštěnou směs autoklávujte po dobu 15 minut při 121 ° C a nechejte ji vychladnout na 50 ° C, promíchejte a nalijte 20 ml do sterilních Petriho misek. Nechejte ztuhnout, převraťte a uložte do chladničky až do použití.

Hodnota pH by měla být 7,3 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je bílá a připravené médium je světle jantarové, mírně zakalené kvůli přítomnosti vločkovité sraženiny..

Czapekovo médium při kyselém pH

Připravte, jak již bylo popsáno, ale přidejte 10 ml sterilní 10% kyseliny mléčné na každý litr připraveného média. Upravené médium Czapek musí zůstat na pH 3,5 ± 0,2.

Upravené médium Czapek

Naváží se 45,4 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Zbytek přípravku je stejný, jak je popsáno výše. Barva dehydratovaného média je bílá a připravené médium je bělavé. Konečné pH média je 6,8 ± 0,2.

Czapekovo-kvasinkové médium

Také se nazývá agar s kvasnicovým extraktem Czapek (CYA). Obsahuje prvky klasického agaru Czapek plus kvasnicový extrakt.

Použití

Médium Czapek se používá k hledání saprofytických mikroorganismů ve vzorcích půdy, zeleniny, obilí, ovzduší, hmyzu a dalších..

Czapekův agar při kyselém pH se používá pro růst acidofilních mikroorganismů, zatímco modifikovaný Czapekův agar je zvláště vhodný pro tvorbu chlamydospór u druhů komplexu. Candida albicans.

Nakonec je agar s kvasinkami Czapek velmi užitečný pro izolaci Aspergillus a Penicillium..

Zaseto

-Czapkův agar

Při hledání Actinomycetes v půdě postupujte následovně: na vzorek se po dobu 30 minut působí fenolizovaná voda a poté se na Czapekův agar vyseje 1 ml suspenze. Inkubujte při 28 ° C po dobu 5 až 7 dnů.

U vzorků zeleniny, obilí a hmyzu jsou umístěny přímo na agar. Můžete také připravit ředění a zasít 0,1 ml na povrch agaru..

-Upravený Czapekův agar

Pro výsev se použije rovná smyčka nebo jehla, která se napustí tamponem a agar se naočkuje propíchnutím, dokud se nedotkne základny desky. Inkubujte 24 hodin při 28 ° C a zkontrolujte pod mikroskopem nad a pod destičkou, zda se nevytvořily chlamydospory..

Inkubační teplota a čas

Inkubační teplota a čas se liší v závislosti na typu mikroorganismu, který má být izolován. Destičky se obvykle inkubují po dobu jednoho až dvou týdnů při teplotním rozmezí 20 až 25 ° C..

U některých kmenů však existují zvláštní podmínky. Například většina druhů rodu Aspergillus má optimální růst při 30 ° C; nicméně A. fumigatus roste při 50 ° C.

Pokud jde o inkubační dobu, je normální jeden nebo dva týdny Candida albicans se může vyvinout za 24 až 48 hodin při 25 ° C.

Vlastnosti některých kolonií na tomto médiu

-Penicillium atrovenetum

Vyvíjí se za 12 dní inkubace při 27 ° C. Jejich kolonie jsou malé (25 mm).

Kolonie mají sametový vzhled, s definovaným bílým okrajem a ve středu má modrozelený odstín, který se stárne šedě. Zadní strana kolonie je oranžová, čímž se díky produkci pigmentu umisťuje do středu stejné barvy.

-Aspergillus niger

Vyvíjí se s bílým až žlutým myceliem a černými spórami.

-Candida albicans

Vznikají krémové světle béžové kolonie. V modifikovaném Czapekově agaru se tvoří chlamydospory.

-Aspergillus parasiticus

Tmavě zelené mycelium se vyvíjí za 7 dní při 25 ° C.

QA

K vyhodnocení kvality kultivačního média lze vysít certifikované kontrolní kmeny, například: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger během asi 5 dnů se vyvine bílé až žluté mycelium a černé spory Candida albicans bude mít uspokojivý růst za 24 hodin inkubace při 25 ° C; kolonie jsou krémové barvy.

Omezení

Některé studie odhalily, že pro získání Actinomycetes je agarem s nejlepším výtěžkem agar s bramborovou dextrózou, zatímco Czapekův agar je druhý, ale pro získání Aspergillus a Penicillium je Czapekův agar ten, který poskytuje nejvyšší míru obnovy..

Reference

  1. Dávila M a kol. Actinomycety antagonistické proti fytopatogenním houbám zemědělského významu. Rev. Mex. Věda. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. K dispozici na: scielo.org.
  2. Luna M, Lozada Y, Trigos Á. Izolace kmenů Aspergillus niger, výrobci ochratoxinu A ve skladované zelené kávě (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. K dispozici na.scielo.org.
  3. Přispěvatelé z Wikipedie. Czapek medium. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. ledna 2019, 20:30 UTC. K dispozici na: en.wikipedia.org
  4. Laboratoře Conda Pronadisa. Upravený agar Czapek-Dox. K dispozici na: condalab.com
  5. Kulturní média Microkit. Czapek-Doxův agar. Diosponible in: Medioscultivo.com

Zatím žádné komentáře