Hektoenův agarový základ, příprava a použití

775
Alexander Pearson
Hektoenův agarový základ, příprava a použití

The Hektoenův agar nebo enterický Hektoenův agar je pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. Byl vytvořen v Hektoenově institutu Kingem a Metzgerem pro izolaci enteropatogenních bakterií rodů Shigella a Salmonella.

Médium se skládá z proteosového peptonu, kvasnicového extraktu, žlučových solí, laktózy, sacharózy, salicinu, thiosíranu sodného, ​​chloridu sodného, ​​citrátu železitého, citronanu amonného, ​​bromtymolové modři, kyselého fuchsinu a agaru. Tato formulace umožňuje odlišit rody Shigella a Salmonella od zbytku bakterií schopných růstu v tomto médiu..

A. Agar Virgin Hektoen B. Naočkovaný agar Hektoen. Zdroj: Flickr.com/ Původním nahrávacím programem byl Philippinjl na francouzské Wikipedii. [CC BY-SA 2.0 fr (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/fr/deed.en)]

Přestože existují i ​​jiná média se stejnou funkcí jako agar Hektoen, má ve srovnání s jinými médii větší výhodu, zejména pokud chcete získat druhy Shigella..

Druhy obou pohlaví způsobují u lidí závažné gastrointestinální problémy v důsledku konzumace kontaminovaných potravin; přenos je tedy fekální - orální. Proto je použití agaru Hektoen indikováno hlavně v mikrobiologické analýze vzorků stolice a potravin..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Hektoenův agar obsahuje peptony a kvasnicový extrakt jako zdroj živin, které poskytují základní prvky pro mikrobiální vývoj.

Má však také žlučové soli, které působí inhibicí růstu některých bakterií, zejména grampozitivních a gramnegativních. Z tohoto důvodu je považován za selektivní médium.

Na druhé straně je Hektoenův agar diferenciálním médiem. Tato vlastnost je dána přítomností fermentovatelných sacharidů, jako je laktóza, sacharóza a salicin, společně s indikátorovým systémem pH, představovaným bromtymolovou modří a kyselým fuchsinem..

U všech bakterií schopných růstu na tomto médiu, které nepatří do rodu Salmonella a Shigella, se vyvinou lososové nebo oranžové kolonie, s výjimkou rodu Proteus. To je způsobeno fermentací jednoho nebo více přítomných sacharidů, které okyselí médium, což způsobí změnu indikátoru pH..

Rod Shigella a Salmonella není schopen fermentovat žádný z přítomných sacharidů, přičemž jako zdroj energie používá pouze peptony, které alkalizují médium, a proto jsou jejich kolonie modrozelené.

V tomto médiu lze také rozlišit bakterie schopné tvořit sirovodík (bezbarvý plyn). Jako zdroj síry působí thiosíran sodný, zatímco vyvolávajícím činidlem je citrát železitý. Obě sloučeniny umožňují tvorbu černé sraženiny sulfidu železa, která ukazuje reakci.

Černá sraženina ve středu kolonie s průhlednou halo kolem ní dává rybí oko vzhled. Tato vlastnost naznačuje přítomnost rodu Salmonella.

Nakonec chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu a agar poskytuje médiu tuhou konzistenci..

Příprava

Naváží se 76 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs intenzivně protřepejte a poté ji nechejte 10 až 15 minut odpočívat. Může být ohříván a vařen, což umožňuje rotační pohyby až do úplného rozpuštění. Toto médium není autoklávováno.

Když médium dosáhne teploty přibližně 45 ° C, nalijte objem 20 ml přímo do sterilních Petriho misek..

Agar se nechá ztuhnout. V té době jsou připraveny k použití. Doporučuje se je okamžitě použít. Pokud to není možné, jsou až do použití uloženy v chladničce..

Talíře je třeba před naočkováním vyjmout z chladničky, aby se zahřály na pokojovou teplotu.

Hodnota pH média by měla být 7,5 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je fialová a připravené médium je hnědavě zelené.

Použití

K hledání bakterií rodu Shigella a Salmonella ve vzorcích stolice a potravin se doporučuje použití agaru Hektoen..

Možnost izolace těchto bakterií je značně zvýšena, pokud je vzorek dříve obohacen o speciální bujóny, jako je seleničitý bujón, cystinsilénový bujón, tetrathionátový bujón atd..

Inokulum musí být silné a setí se provádí šňůrou. Destičky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v aerobióze.

Doporučuje se inkubace po dobu 48 hodin, protože vlastnosti kolonií jsou v současné době jasnější pro jejich interpretaci a diferenciaci..

QA

K provádění kontroly kvality na tomto médiu se používají certifikované bakteriální kmeny, například: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 a Shigella sonnei ATCC 25931.

Očekávané výsledky jsou následující: Salmonella typhimurium a  Salmonella enteritidis měly by vyvinout modrozelené kolonie s černým středem nebo bez něj. Zatímco druh Shigella bude růst jako zeleno-modravé kolonie.

Kmeny Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 a Zlatý stafylokok ATCC 25923.

V těchto případech jsou sledované charakteristiky následující: E-coli Y K. pneumoniae kolonie se vyvinou v této střední lososové barvě až oranžové, se sraženinou stejné barvy kolem. Zatímco Proteus vyvine modrozelené kolonie s černým středem nebo bez něj..

Zatímco S. aureus Y  E. faecalis někdy musí být potlačeno E. faecalis dokáže růst jako velmi malé žluté kolonie.

Na druhou stranu, protože toto médium není autoklávované, je důležité vyhodnotit sterilitu média. Z každé připravené šarže by proto měla být jedna až dvě neočkované destičky inkubovány při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobióze..

Na talíři se samozřejmě neočekává žádný růst.

Omezení

-V tomto médiu se mohou vyvinout druhy Proteus a vlastnosti jejich kolonií lze zaměnit s druhy Salmonella nebo Shigella. Z tohoto důvodu musí být každá podezřelá kolonie potvrzena biochemickými testy..

-Je nutné doprovodit použití tohoto média s jinými méně selektivními agary, protože pokud je hledaný mikroorganismus nalezen v nízkých koncentracích, nemusí se v tomto médiu vyvíjet..

-Během přípravy se nepřehřívejte, protože nadměrné teplo mění složení média.

-Kolonie Salmonella fermentující laktózu se mohou objevit neobvykle a mohou zůstat bez povšimnutí.

Reference

  1. Přispěvatelé z Wikipedie. Hektoenův enterický agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. března 2019, 23:38 UTC. K dispozici na: .wikipedia.org / Přístup 16. března 2019.
  2. BD Laboratories. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Dostupné na: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Enterální agar Hektoen. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoenův agar. K dispozici na: f-soria.es
  5. Manuál Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. 2. vydání. K dispozici na: bd.com/europe

Zatím žádné komentáře