Odůvodnění a příprava sójového agaru s trypticaseinem

4358
Alexander Pearson

The Sójový agar Trypticasein nebo Trypticase Soy Agar je pevné, neselektivní a výživné kultivační médium. Je označen písmeny TSA pro svou zkratku v angličtině Trypticase Soy Agar. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného a agar-agaru.

Díky své vysoké nutriční síle je ideální pro pěstování středně náročných a nenáročných mikroorganismů. Médium bez dalších doplňků se nedoporučuje pro primární kultury, ale je velmi užitečné mimo jiné pro subkultivaci čistých kmenů a pro udržení jejich životaschopnosti..

Klíny sójového agaru tryptikasinu v tubách s bakelitovým uzávěrem. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Tento agar také slouží jako základna pro přípravu obohaceného média, jako je krevní agar, zejména je-li nutné sledovat hemolytické vzorce a namontovat optochinové a bacitracinové taxony vyžadované při diagnostice Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes resp.

Na druhou stranu, v kombinaci s antibiotiky je užitečné izolovat fakultativní a přísné anaerobní mikroorganismy klinického významu ze vzorků se smíšenou flórou..

Nakonec složení sójového agaru tryptikasin a jeho vlastnosti splňují požadavky stanovené různými lékopisy (evropskými, japonskými a severoamerickými)..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Desky sójového agaru tryptikasin
    • 2.2 Tryptikasinové sójové agarové destičky doplněné krví
    • 2.3 Tryptikasinové sójové agarové destičky doplněné zahřátou krví
    • 2.4 Tryptické sójové agarové klíny
  • 3 použití
  • 4 zaseto
  • 5 Kontrola kvality
    • 5.1 Kontrola sterility
    • 5.2 Kontrola růstu
    • 5.3 Kontrola růstu a hemolýza sójového agaru trypticasein doplněného krví
  • 6 Reference

Základ

Pro správný vývoj bakterií je nezbytná přítomnost dodávek energie, jako jsou aminokyseliny, vitamíny, purické a pyrimidové báze..

V tomto smyslu poskytuje triptein a sójový pepton tyto živiny mikroorganismům, což umožňuje jejich plný rozvoj. U náročných bakterií je však nutné tento agar doplnit o defibrinovanou krev nebo o zahřátou krev, aby se zvýšilo jeho obohacení..

Na druhou stranu, pokud se do média přidají antibiotika, stane se selektivním médiem. Můžete také přidat 0,6% kvasinkového extraktu, abyste podpořili izolaci druhů rodu Listeria, zatímco přidání cystin teluritu Y jehněčí krev je ideální pro Corynebacterium diphteriae.

Nakonec chlorid sodný poskytuje médiu osmotickou rovnováhu a agar pevnou konzistenci..

Příprava

Desky ze sójového agaru trypticasein

K přípravě sójového agaru tryptikasin je třeba v digitálním měřítku zvážit 40 g dehydratovaného komerčního média. Rozpouští se v litru destilované vody obsažené v baňce.

Směs se nechá 5 minut odpočívat a poté se přenese do zdroje tepla, aby se médium pomohlo rozpustit. Mělo by se často míchat a vařit 1 nebo 2 minuty. Následně se médium sterilizuje v autoklávu po dobu 15 minut při teplotě 121 ° C.

Nechejte vychladnout na 50 ° C a rozdělte do sterilních Petriho misek. Nechejte ztuhnout, převraťte, naložte do kbelíků a uložte do chladničky.

Konečné pH média musí být 7,3 ± 0,2.

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě 10 až 35 ° C na suchém místě.

Připravený agar má částečně světle jantarovou barvu. Připravené talíře by měly být až do použití skladovány v chladničce (2 až 8 ° C)..

Destičky musí před použitím dosáhnout pokojové teploty.

Sójové agary tryptikasinu doplněné krví

Krevní agar se připravuje přidáním 5% defibrinované krve při ochlazení tryptického sójového agaru na 50 ° C. Směs se homogenizuje otáčením jemnými pohyby.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Střední barva by měla být třešňově červená.

Sójové agary tryptikasinu doplněné o zahřátou krev

Při přípravě krevního agaru na bázi TSA postupujte stejným způsobem jako již popsané postupy, ale při opuštění autoklávu jej nechte odpočívat, dokud teplota média nedosáhne přibližně 56 až 70 ° C. V té době se umístí krev a míchá se, dokud médium nezhnědne..

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Barva média je čokoládově hnědá.

Tryptické sójové agarové klíny

Postup přípravy agaru je stejný jako postup popsaný pro destičky, s tím rozdílem, že místo sterilizace média na Petriho miskách se před sterilizací rozdělí mezi 10 až 12 ml ve zkumavkách s víkem Bakelite..

Následně se zkumavky autoklávují při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Při odchodu se opírají o oporu a nechávají je tuhnout.

Připravené klíny jsou zasety podle povrchu a slouží k udržení životaschopnosti určitých nenáročných mikroorganismů po stanovenou dobu..

Aplikace

Sójový agar Trypticasein se používá v následujících případech:

-Jako základ pro přípravu klasického krevního agaru, který se běžně používá ve většině laboratoří.

-Izolace náročných bakterií.

-Pozorování hemolýzy.

-Spouštění diagnostických testů.

-Jako základ pro přípravu speciálního krevního agaru pro Corynebacterium diphteriae, s cystin teluritem Y jehněčí krev.

-Jako základ pro přípravu agaru z jehněčí krve plus kanamycin-vankomycin pro růst anaerobů, zejména Bacteroides sp.

-Pro udržování nenáročných kmenů (Bacterioteca).

-Aerobní mikrobiální počet ve studii mikrobiálního limitu vzorků vody, prostředí, potravin a kosmetiky.

Zaseto

Vzorky lze vysít přímo na povrch sójového agaru Trypticasein doplněného krví nebo jinými přísadami. Je zaseto vyčerpáním.

Zatímco destičky se sójovým agarem tryptikasinu bez přísad se obecně používají k subkultivaci mikrobiálních kmenů (bakterií nebo kvasinek)..

QA

Kontrola sterility

Pro kontrolu sterility různých médií připravených s agarem sójové báze tryptikasinu se doporučuje provést následující: z každé připravené šarže by se měla inkubovat 1 nebo 2 neočkované destičky nebo zkumavky při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se prokázala jejich sterilita. Ve všech případech musí zůstat bez růstu.

Pokud je zjištěna kontaminace, musí být celá dávka zlikvidována..

Kontrola růstu

Ke studiu správné funkce sójového agaru tryptikasinu lze použít následující bakteriální kmeny: Escherichia coli ATCC 8739, Zlatý stafylokok ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 a Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kmeny se naočkují a inkubují aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin.

V každém případě musí být růst uspokojivý.

Lze použít i houby jako Complex Candida albicans ATCC 10231 a Aspergillus niger ATCC 16404. U obou kmenů se očekává dobrý růst.

Kontrola růstu a hemolýza sójového agaru tryptikasin doplněného krví

K ověření správné funkce krevního agaru připraveného s touto bází lze použít následující kmeny: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Naočkovaly se a inkubovaly se při 37 ° C v mikroaerofilitě po dobu 24 hodin..

Růst musí být ve všech případech uspokojivý, s přihlédnutím k tomu v S. pyogenes Je třeba pozorovat beta-hemolýzu (jasný halo kolem kolonie) a to u obou kmenů S. pneumoniae Měla by být pozorována alfa hemolýza (nazelenalý halo kolem kolonií).

Reference

  1. Přispěvatelé z Wikipedie. Tryptikáza Jsem agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. prosince 2018, 15:47 UTC. K dispozici na: https://en.wikipedia.org
  2. Britannia Laboratories. Sójový agar Triptein. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Tryptický sójový agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Redakční Panamericana S.A.
  5. BD Laboratories. Trypticase Jsem Agar. 2014. Dostupné na: .bd.com

Zatím žádné komentáře