Zářivě zelený agarový základ, příprava a použití

974
Egbert Haynes

The jasně zelený agar Je to pevné kultivační médium s vysokým stupněm selektivity. Používá se výhradně k izolaci kmenů rodu Salmonella, existují však určité výjimky, jako jsou druhy typhi a paratyphi, které na tomto médiu nerostou..

Hledání rodu Salmonella je časté ve vzorcích stolice, vody nebo potravin. V tomto smyslu může být toto médium velmi užitečné. Tento agar byl vytvořen v roce 1925 Kristensenem, Lesterem a Jurgensem, později byl upraven Kauffmannem.

Jasně zelený agar. Fermentující a nefermentující kolonie. Zdroj: M J Richardson / výstava Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Je složen z pluripeptonů z peptického trávení živočišné tkáně a pankreatického trávení kaseinu, obsahuje také kvasnicový extrakt, chlorid sodný, laktózu, sacharózu, fenolovou červeň, jasně zelenou barvu a agar-agar..

Vyznačuje se tím, že je pro většinu bakterií spíše nehostinným prostředím, které podporuje růst Salmonelly, nicméně některé koliformní bakterie jsou schopny v něm existovat a vyvíjet se slabě.

Je důležité si uvědomit, že rod Shigella v tomto prostředí neroste a ani neroste Salmonella typhimurium, ani Salmonella paratyphi. Pokud tedy chcete tyto mikroorganismy izolovat, měli byste použít mimo jiné i jiná média, například XLD agar..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Jasně zelený agar
    • 1.2 Varianty jasně zeleného agaru (BGA)
  • 2 Příprava
  • 3 Použití / aplikace
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Reference

Základ

Jasně zelený agar

Každá ze složek, které tvoří médium, plní specifickou funkci, která určuje vlastnosti a vlastnosti agaru..

Pluripeptony a kvasnicový extrakt jsou zdrojem živin, z nichž mikroorganismy přijímají dusík a minerály nezbytné pro jejich vývoj. Laktóza a sacharóza jsou zdroje energie pro mikroorganismy, které jsou schopné je fermentovat..

Jasně zelená je inhibiční látka, která brání růstu grampozitivních bakterií a velkého počtu gramnegativních mikroorganismů..

Chlorid sodný poskytuje médiu osmotickou stabilitu. Zatímco fenolová červeň je indikátorem pH, mění barvu při detekci produkce kyselin z fermentace sacharidů..

Nefermentující kolonie laktózy a sacharózy rostou na tomto médiu v narůžovělé nebo průhledné bílé barvě na červeném pozadí. Například bakterie rodu Salmonella.

Zatímco bakterie fermentující laktózu nebo sacharózu schopné růst na tomto médiu vytvářejí zelenožluté nebo žlutozelené kolonie na zelenožlutém pozadí. Například, Escherichia coli a Klebsiella pneumoniae.

Varianty jasně zeleného agaru (BGA)

Existují i ​​další varianty jasně zeleného agaru; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar a Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL) Agar.

Novobiocinový jasně zelený agar s glukózou (NBG)

Obsahuje sójový agar Trypticase, citrát amonný železitý, pentahydrát thiosíranu sodného, ​​fenolovou červeň, glukózu, jasně zelenou barvu, novobiocin a destilovanou vodu..

Používá se k izolaci kolonií Salmonella ze vzorků stolice.

V tomto případě jsou jasně zelená a novobiocin inhibiční látky, které zabraňují růstu grampozitivních bakterií a některých gramnegativních mikroorganismů..

Thiosíran sodný je zdrojem sulfidu a citrát železitý je zdrojem železa, což je nezbytné k odhalení produkce sirovodíku tvorbou černé sraženiny sirníku železitého..

Glukóza je fermentovatelný sacharid a fenolová červeň je indikátorem pH..

V tomto médiu se kolonie Salmonella vyvíjejí velké s černým středem obklopeným načervenalým halo a následovaným jasně viditelnou oblastí. Některé kmeny Citrobacter freundii produkují kolonie identické s Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Toto médium obsahuje sójový agar tryptikáza, citrát železitý amonný, thiosíran sodný, laktózu, glycerol, jasně zelenou barvu, novobiocin a destilovanou vodu..

Rozdíl mezi tímto médiem a předchozím je ten, že glukóza je nahrazena laktózou a nepoužívá se glycerol a fenolová červeň..

Médium se také používá k izolaci druhů Salmonella, u kolonií dochází k černé barvě v důsledku produkce sirovodíku.

Pouze kolonie, které neprodukují kyselinu z glycerolu nebo laktózy, dosahují produkce H.dvaJe to dostačující, protože nízké pH interferuje s tvorbou HdvaVýsledkem jsou bezbarvé kolonie pro většinu druhů Proteus a Citrobacter..

Příprava

-Naváží se 58 gramů komerčně získaného dehydratovaného média. Přidejte jej do litru redestilované vody. Promíchejte, nechte několik minut odstát a přípravek umístěte pod zdroj tepla, dokud se úplně nerozpustí..

-Autoklávujte při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut, nepřekračujte dobu sterilizace.

-Nechejte stát a podávejte horké ve sterilních Petriho miskách. Konečné pH by mělo být 6,9 ± 0,2.

-Nechejte ztuhnout a až do použití uložte do chladničky. Před naočkováním by desky měly mít pokojovou teplotu.

-Práškové médium má zelenou barvu a připravené má oranžovo-hnědé nebo červeno-zelené barvy, v závislosti na pH a obchodní společnosti. Velmi hnědá barva indikuje přehřátí agaru..

-Jakmile agar ztuhne, nedoporučuje se jej přetavovat, protože se médium zhoršuje..

Použití / aplikace

Toto médium se používá mimo jiné k hledání kmenů rodu Salmonella ze vzorků stolice a mléčných potravin..

Jelikož se jedná o poměrně nehostinné prostředí, je vhodné při použití přímého vzorku zasít hojné inokulum. Jinak by mělo být provedeno předběžné obohacení a obohacení vzorků před zasetím do tohoto média..

Protože některé kmeny Salmonella jsou inhibovány nebo rostou obtížně, doporučuje se doplnit toto médium dalším selektivním agarem pro Salmonella.

Každá kolonie s typickou charakteristikou Salmonella musí být podrobena biochemickým testům pro její definitivní identifikaci..

QA

K testování dobrého výkonu jasně zeleného agarového média lze pomocí kmenů ATCC sledovat jejich vývoj na něm..

Nejběžnější kmeny používané pro kontrolu kvality jsou: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Zlatý stafylokok ATCC 6538.

První 3 by měly dávat narůžovělé nebo průhledné bílé kolonie na červeném pozadí. Salmonella s dobrým vývojem a Proteus se špatným nebo pravidelným růstem.

U Klebsiella a Escherichia se očekávají zelenožluté kolonie se žlutým pozadím a v případě Shigella a Staphylococcus by měly být inhibovány.

Dehydratované médium musí být skladováno při pokojové teplotě na suchém místě, protože médium je velmi hygroskopické.

Reference

  1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo S.A. Brilantně zelený agar. 2009
  2. Britannia Laboratory. Jasně zelený agar. 2015..
  3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Redakční Panamericana S.A

Zatím žádné komentáře