Odůvodnění peptonové vody, příprava a použití

797
Abraham McLaughlin

The peptonová voda Jedná se o kapalné neselektivní obohacovací médium, které se používá především jako ředidlo pro vzorky potravin nebo jiných materiálů. Toto médium je z chemického hlediska velmi jednoduché, obsahuje masový pepton, chlorid sodný a vodu..

Má určitou nutriční hodnotu, což umožňuje obohacení vzorku. Pokud existují zneužité bakterie, má toto médium sílu opravit životaschopnost. Je zvláště užitečný při regeneraci bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae..

Peptonová voda v lahvích. Zdroj: MSc. Marielsa Gil

V případě regenerace Salmonellas se doporučuje použít variantu pufrované peptonové vody; Toto slouží jako médium před obohacením vzorku, v tomto případě obsahuje další prvky, jako je fosforečnan sodný a fosforečnan draselný..

Obvykle se peptonová voda připravuje při neutrálním pH, existují však i jiné varianty, kde je nutné, aby pH bylo 8,5 ± 0,2 (alkalické), protože bakterie, která se má izolovat, je alkalická, jako je Vibrio cholerae.

Kromě toho lze toto médium použít jako základní médium pro testy fermentace sacharidů..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Domácí příprava (nekomerční)
    • 2.2 Příprava s použitím komerčního média
    • 2.3 Příprava na fermentační testy
    • 2.4 Další varianty peptonové vody
  • 3 Použijte
    • 3.1 Vzorky stolice
    • 3.2 Vzorky potravin
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Peptony poskytují živiny potřebné pro růst bakterií, zejména dusík a aminokyseliny s krátkým řetězcem, zatímco chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu..

Médium navíc umožňuje disperzi, homogenizaci a opravu bakteriálních buněk, které byly poškozeny průmyslovými procesy..

Jako ředidlo je ideální, účinně nahrazovat fyziologický roztok (SSF) nebo fosfátový pufrovací roztok (PBS).

Bakteriální růst je evidentní pozorováním jeho zákalu..

Příprava

Domácí příprava (není komerční)

Odvažte 1 g peptonu a 8,5 g chloridu sodného, ​​rozpusťte v 1 litru destilované vody. Hodnota pH by měla být upravena na 7,0. K tomu lze použít 1 N chlorid sodný..

Příprava s použitím komerčního média

Naváží se 15 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Homogenizujte směs. Pokud je to nutné, směs se vaří 1 minutu, aby se napomohlo úplnému rozpuštění. Podávejte podle potřeby v 100 ml lahvičkách nebo 10 ml zkumavkách. Autoklávujte při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut.

Ochlaďte a používejte nebo uchovávejte v chladničce. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je světle jantarové.

Příprava na fermentační testy

K předchozímu přípravku - před sterilizací - je třeba přidat sacharid na konečnou koncentraci 1% plus indikátor Andrade (kyselý fuchsin) nebo fenolová červeň (0,018 g / l). Trubky by měly být vybaveny Durhamovým zvonem, aby bylo možné sledovat tvorbu plynu.

Další varianty peptonové vody

-Pufrovaná nebo pufrovaná peptonová voda

Obsahuje enzymatický hydrolyzát kaseinu, chlorid sodný, dihydrogenfosforečnan draselný a dodekahydrát hydrogenfosforečnanu sodného. Konečné pH je 7,0 ± 0,2.

K jeho přípravě se naváží 20 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Nechte odpočívat přibližně 5 minut. Zahřívejte po dobu 1 minuty, dokud se úplně nerozpustí.

Podle potřeby nalijte do vhodných nádob. Sterilizujte pomocí autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut.

-Alkalická peptonová voda

Naváží se 25 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Postupujte, jak je popsáno výše. Hodnota pH se pohybuje od 8,3 do 8,7.

Použití

Inokulum se provádí přímým umístěním vzorku.

Používá se k ředění vzorků, zejména pokud existuje podezření, že mohou být poškozené bakterie. Ředění jsou obvykle 1:10 a 1: 100.

Inkubujte 24 hodin na aerobióze při teplotě 35-37 ° C.

Vzorky stolice

U vzorků stolice, které hledají Salmonella, se doporučuje použití pufrované nebo pufrované vody jako média před obohacením..

Postupujte takto:

Pokud se vytvoří stolice, odeberte 1 g vzorku. Pokud jsou tekuté, vezměte 1 ml stolice a suspendujte v zkumavce s 10 ml vody s pufrovaným peptonem. U rektálních výtěrů vypusťte materiál výtěru do zkumavky pufrovanou peptonovou vodou.

Ve všech případech vzorek velmi dobře promíchejte a homogenizujte..

Inkubujte při 37 ° C po dobu 18 až 24 hodin. Následně subkultivujte v obohacovacím bujónu, jako je bujón seleničitinového cystinu nebo tetrathionátový bujón, při teplotě 37 ° C po dobu dalších 18-24 hodin. Nakonec kultivujte v selektivním médiu pro Salmonella, jako je například agar SS, agar XLD, agar Hektoen, mimo jiné..

Vzorky potravin

Peptonová voda se používá jako obohacující médium nebo jako jednoduché ředidlo, ale pokud se hledají druhy Salmonella, používá se jako médium před obohacením, jak již bylo popsáno..

V potravinách postupujte následovně:

U pevných potravin vážit 25 g vzorku a u tekutých potravin odměřit 25 ml. Uvedená část se umístí do baněk obsahujících 225 ml peptonové vody. Promíchejte a homogenizujte vzorek.

Pokud existuje podezření na vysokou mikrobiální zátěž, lze provést sériová nebo desetinná ředění, která usnadní počítání jednotek tvořících kolonie (CFU)..

Počet ředění bude záviset na typu vzorku a zkušenostech analytika..

Pokud je naopak podezření, že mikrobiální zátěž je velmi nízká, není nutné provádět ředění. Následně subkultura na selektivním médiu.

V případě potravin z moře, jako jsou měkkýši, ryby, mimo jiné při hledání Vibrio cholerae nebo jiné druhy Vibrio by měla být použita peptonová voda upravená na pH 8,5 (alkalická peptonová voda).

QA

Z každé připravené šarže by měla být inkubována jedna až dvě zkumavky bez naočkování po dobu 24 hodin v aerobióze při 37 ° C. Na konci doby by neměl být pozorován žádný zákal nebo změna barvy.

K hodnocení jejich účinnosti lze také použít známé kontrolní kmeny:

K tomu lze použít následující bakteriální kmeny: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Zlatý stafylokok ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Ve všech případech se očekává uspokojivý mikrobiální vývoj, který je pozorován zákalem média..

Omezení

-Dehydratované médium je velmi hygroskopické, takže musí být chráněno před vlhkostí.

-Médium by se nemělo používat, pokud je pozorován jakýkoli typ poškození.

-Dehydratované kultivační médium by mělo být skladováno při teplotě 10 - 35 ° C

-Připravené médium by mělo být uchováváno v chladu (2-8 ° C).

Reference

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. Techniky pro mikrobiologickou analýzu potravin. 2009, 2. vyd. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko. Verze pro správce příruček a dokumentů (AMyD) Chemické fakulty UNAM 1. Dostupné na: http://depa.fquim.unam.mx
  2. Britannia Laboratories. Pufrovaná peptonová voda. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Peptonová voda. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. Britannia Laboratories. Peptonová voda. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  5. Merck Laboratories. Pufrovaná peptonová voda. K dispozici na: merckmillipore.com
  6. Laboratoře Conda Pronadisa. Alkalická peptonová voda. K dispozici na: condalab.com
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře