SIM medium založení, příprava a použití

3532
Philip Kelley

The poloviční SIM je polotuhý a diferenciální agar, speciálně navržený k identifikaci některých bakterií, zejména z čeledi Enterobacteriaceae. Skládá se z tripteinu, peptonu, síranu železa, síranu amonného, ​​thiosíranu sodného a agaru..

Toto médium umožňuje provedení tří důležitých testů: produkce sirovodíku (HdvaS), tvorba a pohyblivost indolu, proto pochází zkratka SIM. Díky své velké užitečnosti nemůže chybět v bakteriologické laboratoři.

A. Komerční médium SIM B. Test SIM H2S (-), Indol (-) a Motility (+) a SIM H2S (+), Indol (-), Motilita (+). Zdroj: A. Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Na rozdíl od jiných médií musí být polotuhé, aby byla detekovatelná pohybová kapacita některých bakterií. V tomto smyslu tento test funguje velmi dobře pro Enterobacteriaceae, ale ne pro nefermentující gramnegativní tyčinky, kde je upřednostňováno použití jiných metod, jako je zavěšení kapky..

Médium SIM umožňuje rozlišit určité specifické vlastnosti, které charakterizují některé bakterie ve vztahu k ostatním. Například Escherichia coli se vyznačuje tím, že je HdvaS (-), indol (+) a motilita (+), zatímco Proteus mirabilis je to HdvaS (+), indol (-), motilita (+).

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Zdroj energie
    • 1.2 Výroba sirovodíku
    • 1.3 Tvorba indolu
    • 1.4 Pohyblivost
  • 2 Příprava
    • 2.1 Střední SIM
    • 2.2 Kovacovo činidlo
    • 2.3 Erlichovo činidlo
  • 3 použití
    • 3.1 Výsev
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Jedná se o kultivační médium, které je považováno za diferenciální, protože jeho použití rozlišuje mezi mikroorganismy schopnými produkovat sirovodík od těch, které tak nečiní; Zdůrazňuje také ty, které tvoří indol z tryptofanu od těch, které jej netvoří, a nakonec odlišuje pohyblivé bakterie od nepohyblivých..

Zdroj energie

Jako každé kultivační médium obsahuje prvky, které poskytují potřebné živiny, aby se mohly vyvíjet nenáročné mikroorganismy. Tyto prvky jsou reprezentovány peptony a tripteinem.

Vývoj mikroorganismu v médiu je zásadní, aby bylo možné pozorovat přítomnost nebo nepřítomnost charakteristik, které toto médium hodnotí..

Výroba sirovodíku

Písmeno S zkratky SIM označuje produkci sirovodíku (HdvaS). Bakterie schopné tvořit sirovodík pohltí síru z thiosíranu sodného.

Jakmile se HdvaS -bezbarvý plyn-, který reaguje se železnou solí přítomnou v médiu a vytváří zřetelně viditelný sulfid železnatý (černá sraženina). Bakterie, které netvoří HdvaAno, ponechat střed původní barvy (béžová).

Přítomnost černé sraženiny může bránit interpretaci motility. Je však známo, že většina Enterobacteriaceae produkujících HdvaS jsou pozitivní motilita, jako je Salmonella, Proteus a Citrobacter. Černá sraženina, která pokrývá téměř celé médium, navíc naznačuje pozitivní motilitu.

Tvorba indolu

Druhé písmeno zkratky SIM je „I“, což představuje vznik indolu.

V tomto smyslu plní triptein kromě toho, že je zdrojem živin, další základní funkci. Tento pepton je bohatý na aminokyselinu zvanou tryptofan, a proto může ukázat bakterie, které produkují tryptofanázu.

Tento enzym je odpovědný za štěpení aminokyseliny tryptofanu s následnou tvorbou indolu (bezbarvá látka), kyseliny pyrohroznové a amonného.

Proto je k prokázání této reakce nutné přidat odhalující látku (Ehrlichovo činidlo nebo Kovacovo činidlo). Buď reaguje s indolem, přičemž na povrchu agaru vytvoří látku ve tvaru červeno-fuchsiové prstence. Pokud se objeví fuchsiový kruh, je indolový test interpretován jako pozitivní.

Bakterie, které tento enzym neobsahují, kruh nevytvoří a je interpretován jako negativní indolový test.

Je důležité si uvědomit, že indolový test by měl být interpretován jako poslední, protože po přidání činidla se médium zakalí, což ztěžuje vizualizaci motility..

Pohyblivost

A konečně písmeno „M“ slova SIM znamená pohyblivost. Aby bylo možné vyhodnotit pohyblivost, je toto médium strategicky polotuhé, protože tato charakteristika je nezbytná pro to, aby bylo možné sledovat, zda dochází k bakteriálnímu pohybu či nikoli. Bakterie, které mají bičíky, jsou ty, které dávají tento pozitivní test.

Pozitivní test bude patrný při pozorování zákalu jak v počátečním inokulu, tak v jeho okolí. Zatímco nemotilní bakterie se vyvíjejí pouze v cestě počátečního inokula.

Příprava

Střední SIM

Naváží se 30 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs se nechá 5 minut stát, poté se zahřeje k varu a za stálého míchání se často míchá, dokud se úplně nerozpustí..

Směs se distribuuje do zkumavek s bavlněnými čepičkami a autoklávuje se při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte stojan na zkumavky z autoklávu a nechte ztuhnout ve svislé poloze, aby médium mělo tvar bloku.

Z důvodu ochrany je až do použití uchováván v chladničce. Připravené médium musí mít konečné pH 7,3 ± 0,2.

V době naočkování musí mít médium pokojovou teplotu. Střední barva je béžová.

Kovačovo činidlo

Odměřte 150 ml amylového nebo izoamylového nebo butylalkoholu. (Použijte jednu ze tří zmíněných).

10 g p-dimethylaminobenzaldehydu se rozpustí. Potom pomalu přidejte 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Činidlo připravené k použití je bezbarvé nebo světle žluté. Mělo by být uchováváno v jantarové lahvi a skladováno v chladničce. Nepoužívejte, pokud má tmavě hnědou barvu; což znamená, že je poškozený. Toto činidlo je preferováno, pokud jde o Enterobacteriaceae.

Erlichovo činidlo

Naváží se 2 g p-dimethylaminobenzaldehydu a rozpustí se ve 190 ml absolutního ethylalkoholu a pomalu se míchá se 40 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Zachovejte Kovacovo činidlo stejným způsobem. Ehrlichovo činidlo se používá spíše pro nefermentující a anaerobní bakterie.

Aplikace

SIM médium se velmi používá v bakteriologických laboratořích. Má tu výhodu, že ve stejné zkumavce lze pozorovat tři základní charakteristiky při identifikaci Enterobacteriaceae..

Zaseto

Správným způsobem setí tohoto média je použití jehly, pomocí které se odebere část čisté kolonie, která má být studována, a vložena svisle do středu média. Je třeba provést jeden výpad. Propíchnutí by nemělo zasáhnout spodní část tuby, správná věc je pokrýt jen dvě třetiny hloubky.

Nedoporučuje se opakovat inokulum, protože to může vést k nesprávným interpretacím pozitivní motility. Naočkované médium se inkubuje aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin..

Po uplynutí doby se pozoruje, zda došlo k produkci HdvaPřečte se S a pohyblivost. Nakonec je indol odhalen přidáním 3 až 4 kapek Ehrlichova nebo Kovacova činidla, jemně promíchán a interpretován.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

QA

Jako kontrola sterility se jedna nebo dvě zkumavky inkubují bez inokulace v sušárně při 37 ° C po dobu 24 hodin. Očekává se, že po této době nedojde k žádnému růstu ani změně barvy.

Jako kontrola kvality lze použít certifikované známé kmeny, například: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očekávané výsledky jsou: Escherichia coli HdvaS negativní, indolová a pozitivní motilita, Enterobacter aerogenes pouze pozitivní pohyblivost, Salmonella typhimurium HdvaS a pozitivní motilita, se záporným indolem. Proteus vulgaris všechny pozitivní, zatímco Klebsiella pneumoniae Y Shigella sonnei všechny negativní.

Omezení

-Některé kmeny Morganella morganii, Kromě jiných kmenů mohou v tomto médiu produkovat nahnědlý pigment kvůli produkci melaninu, což by nemělo být zaměňováno se sraženinou sulfidu železnatého. U nezkušených profesionálů může tato situace generovat falešně pozitivní výsledky při interpretaci H testu.dvaS.

-Přísné aerobní bakterie budou růst pouze na povrchu tuby, což ztěžuje interpretaci pohyblivosti.

Reference

  1. BD Laboratories. BBL SIM střední. 2008. Dostupné na: bd.com
  2. Neogen Laboratories. SIM střední. K dispozici na: potraviny
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM střední. 2009. Dostupné na: http://f-soria.es
  4. Laboratoř Brizuela-Lab. Střední SIM. K dispozici na: .brizuela-lab.com
  5. Britannia Laboratories. Střední SIM. 2015. Dostupné na: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře