Bengálská růže Jedná se o laboratorní test založený na reakci antigenu a protilátky pro diagnostiku brucelózy. Tato technika umožňuje detekci specifických protilátek proti bakteriím Brucella abortus ve vzorcích lidského séra. Výsledek lze zaznamenat kvalitativně nebo semikvantitativně.
Kvalitativní forma vyjadřuje, zda je pacient pro test pozitivní nebo negativní, to znamená, zda existují protilátky. Mezitím se semikvantitativní zpráva uvádí v IU / ml a udává přibližné množství přítomných protilátek. Je třeba poznamenat, že protilátky budou produkovány pouze v případě, že pacient byl v kontaktu s mikroorganismem.
Díky své velké jednoduchosti, vysoké citlivosti a specificitě je jednou ze séroaglutinačních technik, které se v medicíně nejčastěji používají jako počáteční test pro diagnostiku tohoto onemocnění..
Někteří vědci porovnali účinnost testu Rose Bengal s jinými technikami, jako je seroaglutinace (febrilní antigeny), a zjistili, že i když existuje dobrá korelace, viděli ojedinělé případy, kdy byl test febrilního antigenu negativní a vzplanutí Rose de Positive.
Získaný rozdíl byl způsoben skutečností, že tito pacienti měli podtřídu IgG protilátek proti Brucella abortus s lepší vazebnou kapacitou při kyselém pH, proto by mohly reagovat s činidlem Rose Bengal, ale ne s febrilními antigeny.
V tomto smyslu navrhli, aby činidla reagující na techniku febrilního antigenu byla upravena na kyselé pH, aby mohli detekovat tento typ případů..
Rejstřík článků
Činidlo Rose Bengal Reagent se skládá z antigenní suspenze. Skládá se z kmene S99 Brucella abortus, zředěný v kyselém laktátovém pufru (pH 3,6), plus fenol a barvivo Rose Bengal.
Proto ve vzorku, který je hledán, jsou protilátky proti Brucelle, pokud jsou přítomny, budou reagovat s reagenčním antigenem a bude pozorována makroskopicky viditelná aglutinační reakce. Test detekuje protilátky IgM nebo IgG.
To znamená, že dokáže detekovat onemocnění jak v akutním stadiu, kde převládají protilátky IgM, tak v chronickém stadiu, kde převládají protilátky IgG..
To představuje výhodu, protože zvyšuje citlivost testu, ale zároveň je nevýhodou, protože nediskriminuje jeden stupeň od druhého, protože reakce s IgM a IgG protilátkami jsou identické.
Zkouška musí být vždy provedena společně s negativní kontrolou a pozitivní kontrolou. Negativní kontrola obsahuje zvířecí sérum bez protilátek a pozitivní kontrola obsahuje sérum zvířecího původu s 50 IU / ml protilátek proti Brucella..
Brucelóza je závažné onemocnění, které má tendenci být chronické a nebezpečné, proto je velmi důležité, aby byla diagnostikována včas. Jde o zoonózu a lidé mohou být nakaženi přímým kontaktem s kontaminovaným materiálem, nejzranitelnějšími osobami jsou veterináři a chovatelé zvířat.
K infekci může dojít také konzumací infikovaného surového masa, mimo jiné formy nákazy.
Toto onemocnění útočí lokálně nebo systémově. Systémová forma je nejzávažnější, protože mohou být ovlivněny různé orgány, včetně endoteliálního systému retikula (játra, slezina, kostní dřeň), kůže (celulitida a lymfadenopatie), dýchacího systému (pneumonie), pohybového aparátu (artritida, sakroiliitida a spondylitida) ), mezi ostatními.
Test Rose Bengal je velmi užitečná technika pro provedení počátečního screeningu, protože je velmi levný, snadno použitelný a s velkou specificitou a citlivostí..
Případy falešně negativních a falešně pozitivních nálezů jsou velmi vzácné a mohou se objevit u lidí s velmi nízkým titrem protilátek (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 IU / ml).
-Sada bengálských růží
-Aglutinační deska bílé pozadí
-50 µl pipety
-Rotátor (volitelně)
-Vír
Komerční soupravy Rose Bengal jsou dodávány s reagenty připravenými k použití.
-Činidla před zahájením práce temperujte.
-Na aglutinačních destičkách jsou nakreslené kruhy, každá pro jiný vzorek. Použijte 3 kruhy, první pro negativní kontrolu, druhý pro vzorek a třetí pro pozitivní kontrolu.
-Umístěte kapku nebo 50 µl kontrol a vzorku do jejich odpovídajícího kruhu.
-Smíchejte reagenci Rose Bengal pomocí víru. Umístěte kapku vedle dříve umístěných.
-Smíchejte s dřevěnými párátky (použijte jeden pro každý vzorek nebo kontrolu). Proveďte kruhové pohyby a roztáhněte je tak, aby pokrývaly celý kruh.
-Umístěte desku na automatický rotátor při 80 až 100 ot / min nebo ji ručně otáčejte po dobu 4 minut. Přečtěte si důkaz na konci této doby.
-Ověřte, zda kontroly poskytly podle očekávání. Porovnejte reakci testovaného vzorku s kontrolami. Nahlásit jako pozitivní, pokud je pozorována aglutinace, a jako negativní, pokud nedojde k aglutinaci.
Pozitivní test ukazuje, že pacient má množství protilátek proti Brucelle rovné nebo větší než 25 IU / ml.
Pokud je v kvalitativní reakci vzorek silně pozitivní, lze jej semikvantifikovat. Za tímto účelem se provádí sériová dvojitá ředění vzorku fyziologickým solným roztokem. Výše popsaný postup se provádí při každém ředění..
Interpretuje se také makroskopickým pozorováním aglutinace. Výsledkem bude titr nejvyššího ředění, ve kterém byl pozorován pozitivní výsledek.
Pro výpočet přibližné hodnoty protilátek proti Brucella se používá následující vzorec:
25 IU / ml x titr reakce = IU / ml
Příklad, pokud má pacient v semikvantitativním testu pozitivní výsledek při ředění ½, ¼ a 1/8 a začíná být negativní od ředění 1/16, znamená to, že má pacient titr 8.
Použití vzorce:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
-Soupravy mají datum vypršení platnosti a je třeba je respektovat. Nemělo by se používat, pokud vypršela reagencie.
-Během používání se ujistěte, že reagencie neobsahuje pevné částice, protože by to znamenalo zhoršení kvality..
-Uchovávejte při teplotě 2 až 8 ° C.
-Chraňte před mrazem, toto opatření neopravitelně poškodí činidlo.
-Vždy proveďte test společně s negativní a pozitivní kontrolou.
-Tato technika toleruje vzorky séra s určitým stupněm lipemie a hemolýzy, není však vhodné používat přehnaně lipemická a hemolyzovaná séra, obě podmínky mění výsledky testu..
-Před zahájením analýzy vždy zahřejte reagencie na pokojovou teplotu..
-Neinterpretujte reakce, které trvají déle, než je doporučená doba, protože to generuje zprávu o falešně pozitivních výsledcích, protože po určité době se činidlo vysráží a simuluje pozitivní reakci.
-Tato technika je 100% citlivá a má specificitu 98%.
-Po semikvantifikaci 1 000 IU / ml existuje možnost pozorovat prozonový účinek (falešně negativní kvůli nadbytku protilátek ve srovnání s množstvím antigenů).
Zatím žádné komentáře