Vlastnosti safraninu, použití, techniky, toxicita

4973
Robert Johnston

The safranin Je to meriquinoidové barvivo, pojmenované kvůli tomu, že má ve své chemické struktuře 2 benzenoidové kruhy a 2 chinoidové kruhy, přičemž ty druhé poskytují červenou barvu.

Nazývá se také dimethyl safranin nebo bazická červená 2 ve své krátké formě, protože její vědecký název je 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-fenylfenaziniumchlor-dimethyl safranin a chemický vzorec je CdvacetH19N4 Cl.

Chemická struktura safraninu indikující benzenoidové a chinoidní kruhy / Vodný roztok safraninu. Zdroj: NEUROtiker [public domain] editoval MSc. Marielsa Gil / LHcheM [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Existuje varianta zvaná trimethyl-safranin, ale mezi těmito dvěma látkami není významný rozdíl.

Safranin je monochromatické barvivo a v závislosti na vlastnostech chemického vzorce je to látka s kladným nábojem. Proto má afinitu k negativně nabitým strukturám. Tyto struktury budou zbarveny červeně.

Tato vlastnost mu dává použitelnost v mnoha histologických technikách pro barvení různých buněčných struktur, a to jak v eukaryotických, tak prokaryotických organismech..

Safranin se používá jako kontrastní barvivo v důležitých a dobře známých technikách pro rutinní použití v bakteriologii. Jedná se o tyto techniky: Gram-Huckerovo barvení, Schaefferovo Fultonovo barvení pro spory nebo barvení bakteriálních tobolek..

Rejstřík článků

  • 1 Funkce
  • 2 Použijte
  • 3 Techniky v oblasti bakteriologie
    • 3.1 Barvivo Castañeda pro rickettsiální barvení
    • 3.2 Modifikovaná Kosterova skvrna pro Brucellu
    • 3.3 Barvení bakteriálních tobolek
    • 3.4 Schaeffer Fulton barvení spór
    • 3,5 Gram-Huckerova skvrna
  • 4 Techniky v oblasti histologie
    • 4.1 Kulchitské barvení buněk (enterochromafiny)
    • 4.2 Barvení pro detekci osteoartrózy
    • 4.3 Barvení pro identifikaci makrořas
  • 5 Toxicita
  • 6 Reference

Vlastnosti

Barva šafránu (koření získaného ze stigmat květu Crocus sativus) byla inspirace pro pojmenování tohoto zbarvení. Z termínu šafrán pochází název safraninu. To je způsobeno velkou podobností mezi barvou šafránu a barvením, které toto barvivo poskytuje..

Safranin se získává ve formě krystalů nebo v prášku, přičemž obě složky jsou rozpustné ve vodě. Safraninové barvivo je bez zápachu. Barví struktury červeně. Struktury, které přitahují safraninové barvivo, se nazývají safranofily..

Strukturálně safranin je složitý, má na koncích dva benzenoidové kruhy a uprostřed jsou dva chinoidní kruhy, kde se nachází N kation.+. Středem struktury je systém odpovědný za poskytování barvy. Díky této vlastnosti je toto barvivo zařazeno do kategorie II..

Použití

Safranin se používá k barvení různých struktur. Zvláště zdůrazňuje Kulchitsky buňky přítomné v gastrointestinálním traktu, nazývané také enterochromafinové buňky.

Je schopen barvit mikroorganismy patřící do rodiny Rickettsiaceae. Podobně se používá v různých technikách, jako je Kosterova metoda, upravená pro barvení bakterií rodu Brucella.

Na druhé straně se safranin používá při barvení spor technikou Schaeffer Fulton a při barvení podle Gram-Huckera. V obou technikách funguje safranin jako kontrastní barvivo.

V prvním případě mají spory barvu malachitově zelené a zbytek struktur je červený safraninem. V druhém případě gramnegativní bakterie ztrácejí barvu fialového krystalu v kroku změny barvy, proto je safranin tím, kdo barví gramnegativní bakterie červeně.

Kromě toho se safranin používá v bakteriologii k přípravě agaru média Brucella s ředěním safraninu 1: 5 000. Toto médium slouží k rozlišení druhů Brucella suis zbytku druhu. Brucella melitensis Y Brucella abortus rostou v tomto prostředí, ale B. suis je potlačen.

V zemědělsko-průmyslové oblasti byl safranin použit v množství 2,25% a zředěn v poměru 1:10 k barvení kmenových vzorků rostliny cukrové třtiny.

Tato rostlina je běžně ovlivněna bakteriemi Leifsonia xyli subsp. xyli, kdo poškozuje xylem rostliny. Zbarvené stonky se vyhodnotí, aby se určila funkce xylemových cév..

Techniky v oblasti bakteriologie

Barvivo Castañeda pro barvení rickettsiae

Krevní nebo tkáňový nátěr se umístí do pufrovacího roztoku (fosfátový pufr pH 7,6). Nechá se spontánně vyschnout a poté se 3 minuty pokryje methylenovou modří a obarví se safraninem. Rickettsie jsou modře zbarvené, kontrastují s červeným pozadím.

Kosterova skvrna upravená pro Brucella

V zapalovači je vytvořen nátěr, který je fixován plamenem. Následně se na 1 minutu přikryje směsí 2 dílů vodného safraninu nasyceného 3 díly 1 mol / l roztoku KOH. Promyje se destilovanou vodou a vybarví se 1% karbolovou methylenovou modří..

Pokud vzorek obsahuje bakterie rodu Brucella tyto budou vypadat oranžově na modrém pozadí.

Barvení bakteriálních tobolek

Směs bakteriální suspenze se vyrobí indickým inkoustem a přidá se k ní safranin. Pod mikroskopem bude kolem každé bakteriální kapsle na černém pozadí pozorována načervenalá halo..

Barvení spór Schaeffer Fulton

S bakteriální suspenzí se vytvoří stěr. Pak se fixuje na teplo. Je pokryta 5% malachitově zelenou barvou, často plamenem, dokud nedojde k uvolňování výparů. Proces se opakuje po dobu 6-10 minut. Nakonec se promyje vodou a po dobu 30 sekund se obarví 0,5% safraninem. Bacily zbarvují červeně a zelené spory.

Gram-Huckerova skvrna

Nátěr je vyroben z bakteriální suspenze a je fixován k zahřátí. Sklíčko na 1 minutu zakryjte krystalickou fialovou. Poté se lugol umístí na 1 minutu jako mořidlo. Následně se vyběluje acetonalkoholem a nakonec se po dobu 30 sekund obarví safraninem..

Gram pozitivní bakterie barví modravě fialové a Gram negativní bakterie červeně.

Některé laboratoře přestaly používat techniku ​​Gram-Hucker k přijetí upravené techniky Gram-Kopeloff. V druhém případě je safranin nahrazen bazickým fuchsinem. Je to proto, že safranin slabě obarví druhy rodů Legionella, Campylobacter Y Brucella.

Techniky v oblasti histologie

Kulchitské barvení buněk (enterochromafiny)

Tkáňové řezy z gastrointestinálního traktu jsou obarveny chloridem stříbrným. Potom se odbarví thiosíranem sodným a nakonec se vybarví safraninem.

Kulchitské buňky se vyznačují přítomností černohnědých granulí..

Skvrna od artrózy

Protože má safranin pozitivní náboj, váže se velmi dobře na karboxylové a sulfátové skupiny glykosaminoglykanů. Jsou součástí proteoglykanů, které tvoří kloubní chrupavku. V tomto smyslu je při barvení safraninem O možné zjistit, zda dochází ke ztrátě chrupavky..

Úbytek tkáně chrupavky lze měřit pomocí Mankinovy ​​stupnice nebo také nazývané stupnice osteoartrózy..

Technika je vysvětlena níže: histologický řez se ponoří do podnosu s Weigertovým roztokem hematoxylinu železa, poté se nechá projít kyselým alkoholem a promyje se vodou.

Pokračujte v procesu barvení ponořením sklíčka do rychle zelené, promyje se kyselinou octovou a nyní se ponoří do safraninu O. Proces se dokončí dehydratací pomocí alkoholů v různých koncentracích ve vzestupném pořadí. Poslední krok vyžaduje pro objasnění vzorek xylen nebo xylol.

Sklíčka jsou upravena kanadským balzámem nebo podobným materiálem, který lze pozorovat pod mikroskopem.. 

S touto technikou jsou jádra obarvena černě, kost zelená a chrupavka, kde jsou proteoglykany červené.

Skvrna pro identifikaci makrořas

Pérez a kol. V roce 2003 navrhli jednoduchou a levnou techniku ​​barvení makrořas. Vzorky se připravují v parafinových histologických řezech. Řezy jsou zafixovány 1% glycerinem, což jim umožňuje úplné vysušení. Poté se umístí do xylolu, aby se odstranil parafín.

Sekce se rehydratuje průchodem řadou tácků obsahujících ethanol v různých stupních koncentrace (sestupně), po dobu 2 minut v každém z nich..

Následně se po dobu 5 minut obarví směsí 1: 1 safraninu s 1% toluidinové modři v poměru 3: 1, obě se připraví s 50% ethanolem. Do směsi se přidají tři kapky kyseliny pikrové, která působí jako mořidlo..

Poté se dehydratuje opětovným projetím zásobníků na alkohol, ale tentokrát vzestupně. Nakonec se propláchne xylolem a vzorek se připraví pomocí kanadského balzámu..

Toxicita

Naštěstí je safranin barvivem, které nepředstavuje nebezpečí pro ty, kdo s ním zacházejí. Je to neškodné barvivo, není karcinogenní a není hořlavé..

Přímý kontakt s kůží nebo sliznicemi může způsobit mírné zarudnutí v oblasti bez větších komplikací. Za tímto účelem se doporučuje postižené místo umýt velkým množstvím vody.

Reference

  1. García H. Safraninové barvivo O. Zdravotní technik, 2012; 1 (2): 83-85. Dostupné na: medigraphic.com
  2. Gil M. Gramovo barvení: základy, materiály, technika a použití. 2019. Dostupné na: lifeder.com
  3. Barvení Gil M. Spore: zdůvodnění, techniky a použití. 2019. K dispozici na: lifeder.com
  4. Safranina. “ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. března 2017, 10:39 UTC. 3. srpna 2019, 20:49 en.wikipedia.org
  5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Užitečná barvicí technika v anatomické interpretaci Gracilariopsis tenuifrons Y Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Minuty Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. K dispozici na: scielo.org.
  6. Iglesia Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Vztah funkčnosti xylemových cév a přítomnosti Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Dostupné na: scielo.sld

Zatím žádné komentáře