Může Grünwald-Giemsa barvit zdůvodnění, techniku ​​a použití

3600
Simon Doyle
Může Grünwald-Giemsa barvit zdůvodnění, techniku ​​a použití

The Může skvrna Grünwald-Giemsa o Pappenheim je technika diferenciálního barvení, při které se míchají činidla Giemsa a May Grünwald. Používá se k rozlišení normálních a abnormálních krevních buněk v nátěrech periferní krve a kostní dřeně, jakož i k barvení histologických řezů a cytologických vzorků..

Obě reagencie - Giemsa a May Grünwald - jsou odvozeny z barvení typu Romanowsky, což je technika založená na kombinaci kyselých a bazických barviv..

Roztěr ukazující segmentovaný neutrofil a millocyt v případě chronické myeloidní leukémie, obarvený skvrnou May Grünwald Giemsa. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) prostřednictvím webu Wikipedia.org.

Giemsa vylepšil techniku ​​stabilizací směsi eosinu, methylenové modři a jejich derivátů s glycerolem. Místo toho May Grünwald používá eosin a methylenovou modř, přičemž jako rozpouštědlo používá methanol. Tato strategická kombinace přinesla vynikající výsledky.

Ačkoli, pokud jde o pozorování morfologie buněk, působí podobným způsobem jako skvrny od Giemsy a Wrighta, tato technika vylepšuje ty předchozí tím, že vylepšuje barvení parazitů, které způsobují malárii, Chagasovu chorobu, leishmaniózu a trichomoniázu..

Kromě toho se ukázalo jako velmi užitečná technika pro cytologické studium spermatické tekutiny. Vynikal nejen tím, že ukazoval morfologické vlastnosti spermií, ale také umožňoval vysokou účinnost diferenciace leukocytů, epiteliálních buněk a buněk spermatogeneze..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Různé barviva
  • 2 Technika
    • 2.1 Materiály
    • 2.2 Koncentrovaný květnový roztok barviva Grünwald
    • 2.3 Koncentrovaná skvrna Giemsa
    • 2.4 Příprava pufrovacího roztoku při pH 7,2
    • 2.5 Postup barvení stěrem krve nebo kostní dřeně
    • 2.6 Technika barvení šmouh spermatické tekutiny
    • 2.7 Důležité specifikace
  • 3 použití
    • 3.1 Vaginální cytologie
    • 3.2 Vzorek spermatu
  • 4 Odkazy

Základ

Tato technika sleduje základ Romanowského skvrn, ve kterých mají kyselá barviva selektivní afinitu k základním buněčným složkám a kyselé složky přitahují základní skvrny..

Vysvětleno jiným způsobem, jak buněčné struktury, tak barviva mají kladné nebo záporné elektrické náboje; jako poplatky odpuzují a různé poplatky přitahují.

Například základní barviva jako methylenová modř jsou kladně nabitá a přitahována k negativně nabitým strukturám. Proto toto barvivo obarví jádra bohatá na DNA a RNA, která mají záporně nabité fosfátové skupiny..

Barveny jsou také granule segmentovaných bazofilů a cytoplazmy mononukleárních bílých krvinek obsahujících RNA..

Stejně tak kyselé barvivo nese záporný náboj, a proto se váže na pozitivně nabité struktury, jako jsou erytrocyty a granule segmentovaných eosinofilů. Pokud jde o granule segmentovaných neutrofilů, tyto fixují obě barviva.

Rozmanitost barviv

V této technice existuje kombinace reakcí mezi ortochromatickými a metachromatickými barvivy. Ortochromatické látky (eosin a methylenová modř) se vážou na buněčnou strukturu, s níž souvisejí, a poskytují stabilní barvu, která se nemění.

Na druhou stranu metachromáty (deriváty methylenové modré azurové A a azurové B) mění svou původní barvu, jakmile jsou připojeny ke konkrétní struktuře, a mohou dokonce existovat různé odstíny.

A konečně, krok, který provede květnové Grünwaldovo řešení, vyžaduje přítomnost vody, protože bez ní barvivo pronikne strukturami, ale nestvrdne. Aby se to stalo, musí se barvivo stát polárním nebo ionizovaným, a tak být schopno vysrážet se a vázat se na související struktury..

Technika

Materiály

- Mikroskopická sklíčka.

- Mosty zbarvení.

- Řešení May-Grünwald.

- Giemsova skvrna.

- Destilovaná voda.

Může Grünwald barvit koncentrovaný roztok

Naváží se 0,25 g eosin-methylenové modři (barvivo podle May Grünwalda) a rozpustí se ve 100 ml methanolu. Poté se přípravek míchá po dobu 1 hodiny a nechá se 24 hodin odpočívat. Když čas vyprší, uniká.

Pro použití této techniky musí být barvivo May Grünwald naředěno následujícím způsobem: pro 200 ml zředěného barviva odměřte 30 ml koncentrovaného roztoku, přidejte 20 ml pufrovacího roztoku a 150 ml destilované vody upravenou na pH 7,2-7,3. Později se promíchá a filtruje.

Koncentrát skvrn Giemsa

Musí se zvážit 0,5 g azurově-eosin-methylenové modři (barvivo podle Giemsy), rozpustit v 50 ml methanolu a do směsi přidat 50 ml glycerinu.

Pro provedení této techniky se zředí 1:10 pufrovacím roztokem a nechá se stát 10 minut. V případě potřeby lze filtrovat.

Příprava pufrovacího roztoku při pH 7,2

Měly by být zváženy:

- 40 mg di-hydrogenfosforečnanu draselného (KH2PO4).

- 151 mg 12hydrátu hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HPO4).

Obě sloučeniny se rozpustí ve 100 ml vody.

Postup barvení skvrn od krve nebo kostní dřeně

Existují dva režimy: klasický a rychlý.

Klasický režim

  1. Nátěry zakryjte 2 až 3 minuty zředěným roztokem May-Grünwald..
  2. Promyjte pufrovanou destilovanou vodou, abyste odstranili předchozí roztok.
  3. Zakryjte stejným pufrovaným promývacím roztokem a nechejte 1 minutu. Myšlenka je, že předchozí barvivo je připevněno ke strukturám a že současně jsou buňky hydratovány.
  4. Přidejte 12 kapek zředěné tinktury Giemsa do pufrované vody a foukáním promíchejte a promíchejte. Nechejte 15-20 minut odstát.
  5. Šmouhy omyjte pufrovanou destilovanou vodou a nechejte uschnout na vzduchu.
  6. Zaostřete a pozorujte obarvené krvinky pod světelným mikroskopem pomocí objektivu 40X. V případě potřeby lze použít 100X.

Rychlý režim

  1. Roztěr po dobu 1 minuty zakryjte zředěným barvivem May Grünwald..
  2. Omyjte pufrovanou destilovanou vodou.
  3. Podlejeme pufrovanou vodou a necháme 1 minutu stát.
  4. Umístěte naředěnou skvrnu Giemsa a nechte působit 5 minut.
  5. Omyjte pufrovanou destilovanou vodou a nechte uschnout na vzduchu.

Zde popsané techniky jsou vodítkem, ale je třeba vzít v úvahu, že postupy a doby barvení se liší podle obchodní společnosti, která distribuuje činidla. Je vhodné postupovat přesně podle pokynů každého obchodního domu.

Technika barvení šmouh spermatické tekutiny

1 - Roztěr na 4 minuty zakryjte tenkou vrstvou roztoku May Grünwald.

2- Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

3 - Umístěte vrstvu zředěné Giemsy (1:10) na 15 minut do destilované vody.

4- Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

5- Nechejte zaschnout a pozorujte v mikroskopu.

Očekávané barvy s barvivem May Grünwald Giemsa

Důležité specifikace

Tato technika vyžaduje, aby pH činidel a promývacích roztoků bylo upraveno na 7,2 - 7,3, aby nedošlo k narušení afinit barviv k buněčným strukturám a očekávané konečné zbarvení se nemění..

Aplikace

Tuto techniku ​​používají klinické laboratoře k barvení stěrů periferní krve a kostní dřeně, tkáňových řezů a cytologií..

V hematologické oblasti má tato technika zásadní význam při studiu abnormalit buněk z hlediska tvaru, velikosti a počtu. Je to velmi cenný nástroj pro diagnostiku určitých nemocí, jako jsou leukémie a anémie.

Kromě toho je mimořádně užitečný při hledání parazitů v hematologických oblastech (Plasmodium sp Y Trypanosome cruzi) nebo histologické (Leishmanias sp).

Vaginální cytologie

Pokud jde o vaginální cytologii, je tato technika zvláště výhodná pro pozorování Trichomonas vaginalis. Toto je důležité zjištění, protože jeho přítomnost simuluje obrázky karcinomu. in situ které pak zmizí, když je parazit odstraněn.

Vzorek spermatu

Byl to ideální nástroj pro studium vzorků spermií, protože poskytuje cenné informace o kvalitě spermií.

Data, která nabízí, se týkají hlavně počtu a morfologie, jakož i doprovodných buněk, které mohou být přítomny a které mají zásadní význam, jako jsou zárodečné buňky, leukocyty a epiteliální buňky..

Pomocí této analýzy je možné popsat abnormality pozorované ve spermatu v hlavě, krku, středním dílu a hlavní části..

Kromě toho mohou také pomoci ukázat případy hemospermie (přítomnost červených krvinek ve spermatu) a leukospermie nebo piospermie (zvýšený počet leukocytů ve spermatu).

Reference

  1. Costamagna S, Prado M. Validace nového testu, May Grünwald-Giemsa a Gramovy skvrny a kultivační média pro diagnostiku Trichomonas vaginalis. Parazitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. K dispozici v: scielo.
  2. Laboratoř Merck KGaA. Může Grünwald eosin methylenová modř pro mikroskopii.
  3. „Skvrna May-Grünwald-Giemsa.“ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. listopadu 2018, 14:37 UTC. 8. ledna 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratoř skleněných chemikálií Panreac. Reagencie pro histologické techniky, hematologii a mikrobiologii. K dispozici na: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Doporučení pro barvení krevních nátěrů pro čtení hemogramu. Národní a referenční biomedicínská laboratoř. Institut veřejného zdraví Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram podle kritérií WHO. Program vývojové anatomie a biologie. Lékařská fakulta. University of Chile. K dispozici na: pp.centramerica.com

Zatím žádné komentáře