The VELKÝ agar Je to pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. Byl navržen tak, aby izoloval a pomáhal při identifikaci hlavních druhů Candida. Jeho název BIGGY pochází ze zkratky v angličtině Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Původní vzorec vytvořil Nickerson, a proto je toto médium známé také jako Nickersonův agar. V současné době se skládá z kvasnicového extraktu, glycinu, dextrózy, citrátu amonného, citrátu bismutu, siřičitanu sodného a agaru..
BIGGY agar je formulován pro diferenciaci druhů Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei a C. kefyr, ale rostou také jiné druhy Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum a Saccharomyces cerevisiae.
Má dobrou citlivost a specificitu, ale ve srovnání s jinými médii s podobnou funkcí je na druhém místě a je překonán CHROMagar. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří dává přednost tomu druhému, i když je to mnohem dražší..
Mělo by být jasné, že použití BIGGY Agaru, stejně jako jiných podobných prostředků, pomáhá rychle předpokládat identifikaci, ale nikdy potvrzující. Proto musí být k dispozici další metody identifikace; např. identifikační systémy Vitek 32 a API 20.
Rejstřík článků
BiGGY agar je považován za částečně selektivní médium pro izolaci kvasinek, zejména rodu Candida, i když mohou růst další rody.
Je to také rozdílné médium, protože v závislosti na druhu, kterého se to týká, budou pozorovány různé vlastnosti, pokud jde o vzhled, barvu, tvar a velikost. To je považováno za chromogenní médium, kvůli vývoji různých barev v koloniích.
Barva kvasinkových kolonií je způsobena přítomností siřičitanu bismutitého v agaru. Nickerson si uvědomil, že kvasinky rodu Candida provádějí extracelulární redukci siřičitanu bismutitého a transformují jej na sulfid bismutitý (nerozpustná černá látka). Výsledkem jsou světle hnědé až černé kolonie..
Tento agar obsahuje kvasnicový extrakt a dextrózu, které poskytují zdroj základních živin a energii pro vývoj kvasinek. Glycin je stimulant růstu kvasinek a inhibuje růst určitých bakterií.
Ve stejném smyslu působí jako inhibitory růstu bakterií citronan amonný a vizmut, stejně jako siřičitan sodný. Agar je prostředek, který dodává středně tuhou konzistenci.
Naváží se 45 g dehydratovaného kultivačního média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs protřepejte a zahřejte, vařte 1 minutu, dokud se úplně nerozpustí. Toto kultivační médium není autoklávovatelné.
Po ochlazení na vodní lázni na přibližně 45 ° C nalijte 20 ml na sterilní Petriho misky..
Barva dehydratovaného média je nažloutlá šedá a připravený je nažloutlý bílý gel, ve kterém lze pozorovat jemnou vločkovitou sraženinu.
Hodnota pH by měla být 6,8 ± 0,2.
Připravené médium by mělo být skladováno v chladničce (4 ° C) a chráněno před světlem. Jelikož jde o médium, které nelze autoklávovat, mělo by být použito co nejdříve. Jeho použití se doporučuje do 3 dnů od jeho přípravy.
Destičky se inkubují při teplotě místnosti (25 ° C) po dobu 24, 48 a 72 hodin a inkubační doba se může prodloužit až na 5 dní..
Každý druh Candida vyvíjí určité vlastnosti, které ji odlišují. Výrobci média popisují pro každý druh následující vlastnosti:
-Komplex Candida albicans: se na tomto agaru vyvíjí jako hladké, kulaté, hnědé nebo černé kolonie s mírným myceliálním okrajem. S tou výjimkou, že tmavá barva nedifunduje do média.
-Candida tropicalis: kolonie jsou světlé, malé, tmavě hnědé, s černým středem a mírným myceliálním okrajem. Tmavá barva difunduje směrem ke středu, což je charakteristika typická pro tento druh poté, co byla inkubována po dobu 72 hodin..
-Candida krusei rozvíjí velké, ploché, drsně vypadající kolonie s hnědým až načernalým okrajem.
-Candida parakrusei: středně velké kolonie, většinou drsné, ploché. Barva se může pohybovat od světlé tmavě červenohnědé až po světle červenohnědou. Hranice kolonií mají rozsáhlé nažloutlé mycelium.
-Candida stellatoidea: Vyvíjí střední, ploché, tmavě hnědé, téměř černé kolonie. Myceliální vývoj je velmi vzácný.
Studie provedená Yücesoyem a Marolem v roce 2003 ukázala, že médium CHROMagar má lepší senzitivitu a specificitu pro diferenciaci a identifikaci různých druhů Candida než agar BIGGY..
Pro kontrolu sterility se neočkované destičky inkubují při 25 ° C, ve tmě po dobu 24 až 48 hodin, předpokládá se, že nedojde k žádnému růstu ani ke změně barvy..
Kmeny ATCC doporučené pro kontrolu kvality média jsou:
Komplex Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. U všech z nich se očekává růst, jak je popsáno výše..
Lze také použít následující kmeny:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. V prvních dvou se očekává úplná inhibice, ale v případě částečně rostoucích kolonií budou krémově zbarveny.
V případě S. aureus Očekává se, že bude zcela potlačen, ale pokud částečně rostou, jsou jejich kolonie bílé.
Některé bakterie se v tomto médiu mohou vyvinout a mohou dokonce ztmavnout, což simuluje kolonii Candida, ale když vytvoří kolonu rozmazanou a pozoruje ji pod mikroskopem, snadno se vyřadí.
Tabulka: Charakteristiky kolonií některých kvasinek na BIGGY agaru podle práce Yücesoy M a Marol S..
Zatím žádné komentáře