BIGGY agarový základ, příprava a použití

3697
Jonah Lester
BIGGY agarový základ, příprava a použití

The VELKÝ agar Je to pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. Byl navržen tak, aby izoloval a pomáhal při identifikaci hlavních druhů Candida. Jeho název BIGGY pochází ze zkratky v angličtině Bismuth Glucose Glycine Yeast.

Původní vzorec vytvořil Nickerson, a proto je toto médium známé také jako Nickersonův agar. V současné době se skládá z kvasnicového extraktu, glycinu, dextrózy, citrátu amonného, ​​citrátu bismutu, siřičitanu sodného a agaru..

Grafické znázornění agaru BIGGY. Zdroj: Flickr.com

BIGGY agar je formulován pro diferenciaci druhů Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei a C. kefyr, ale rostou také jiné druhy Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum a Saccharomyces cerevisiae.

Má dobrou citlivost a specificitu, ale ve srovnání s jinými médii s podobnou funkcí je na druhém místě a je překonán CHROMagar. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří dává přednost tomu druhému, i když je to mnohem dražší..

Mělo by být jasné, že použití BIGGY Agaru, stejně jako jiných podobných prostředků, pomáhá rychle předpokládat identifikaci, ale nikdy potvrzující. Proto musí být k dispozici další metody identifikace; např. identifikační systémy Vitek 32 a API 20.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

BiGGY agar je považován za částečně selektivní médium pro izolaci kvasinek, zejména rodu Candida, i když mohou růst další rody.

Je to také rozdílné médium, protože v závislosti na druhu, kterého se to týká, budou pozorovány různé vlastnosti, pokud jde o vzhled, barvu, tvar a velikost. To je považováno za chromogenní médium, kvůli vývoji různých barev v koloniích.

Barva kvasinkových kolonií je způsobena přítomností siřičitanu bismutitého v agaru. Nickerson si uvědomil, že kvasinky rodu Candida provádějí extracelulární redukci siřičitanu bismutitého a transformují jej na sulfid bismutitý (nerozpustná černá látka). Výsledkem jsou světle hnědé až černé kolonie..

Tento agar obsahuje kvasnicový extrakt a dextrózu, které poskytují zdroj základních živin a energii pro vývoj kvasinek. Glycin je stimulant růstu kvasinek a inhibuje růst určitých bakterií.

Ve stejném smyslu působí jako inhibitory růstu bakterií citronan amonný a vizmut, stejně jako siřičitan sodný. Agar je prostředek, který dodává středně tuhou konzistenci.

Příprava

Naváží se 45 g dehydratovaného kultivačního média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs protřepejte a zahřejte, vařte 1 minutu, dokud se úplně nerozpustí. Toto kultivační médium není autoklávovatelné.

Po ochlazení na vodní lázni na přibližně 45 ° C nalijte 20 ml na sterilní Petriho misky..

Barva dehydratovaného média je nažloutlá šedá a připravený je nažloutlý bílý gel, ve kterém lze pozorovat jemnou vločkovitou sraženinu.

Hodnota pH by měla být 6,8 ± 0,2.

Připravené médium by mělo být skladováno v chladničce (4 ° C) a chráněno před světlem. Jelikož jde o médium, které nelze autoklávovat, mělo by být použito co nejdříve. Jeho použití se doporučuje do 3 dnů od jeho přípravy.

Použití

Destičky se inkubují při teplotě místnosti (25 ° C) po dobu 24, 48 a 72 hodin a inkubační doba se může prodloužit až na 5 dní..

Každý druh Candida vyvíjí určité vlastnosti, které ji odlišují. Výrobci média popisují pro každý druh následující vlastnosti:

-Komplex Candida albicans: se na tomto agaru vyvíjí jako hladké, kulaté, hnědé nebo černé kolonie s mírným myceliálním okrajem. S tou výjimkou, že tmavá barva nedifunduje do média.

-Candida tropicalis: kolonie jsou světlé, malé, tmavě hnědé, s černým středem a mírným myceliálním okrajem. Tmavá barva difunduje směrem ke středu, což je charakteristika typická pro tento druh poté, co byla inkubována po dobu 72 hodin..

-Candida krusei rozvíjí velké, ploché, drsně vypadající kolonie s hnědým až načernalým okrajem.

-Candida parakrusei: středně velké kolonie, většinou drsné, ploché. Barva se může pohybovat od světlé tmavě červenohnědé až po světle červenohnědou. Hranice kolonií mají rozsáhlé nažloutlé mycelium.

-Candida stellatoidea: Vyvíjí střední, ploché, tmavě hnědé, téměř černé kolonie. Myceliální vývoj je velmi vzácný.

Studie provedená Yücesoyem a Marolem v roce 2003 ukázala, že médium CHROMagar má lepší senzitivitu a specificitu pro diferenciaci a identifikaci různých druhů Candida než agar BIGGY..

QA

Pro kontrolu sterility se neočkované destičky inkubují při 25 ° C, ve tmě po dobu 24 až 48 hodin, předpokládá se, že nedojde k žádnému růstu ani ke změně barvy..

Kmeny ATCC doporučené pro kontrolu kvality média jsou:

Komplex Candida albicans  ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. U všech z nich se očekává růst, jak je popsáno výše..

Lze také použít následující kmeny:

Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. V prvních dvou se očekává úplná inhibice, ale v případě částečně rostoucích kolonií budou krémově zbarveny.

V případě S. aureus Očekává se, že bude zcela potlačen, ale pokud částečně rostou, jsou jejich kolonie bílé.

Omezení

Některé bakterie se v tomto médiu mohou vyvinout a mohou dokonce ztmavnout, což simuluje kolonii Candida, ale když vytvoří kolonu rozmazanou a pozoruje ji pod mikroskopem, snadno se vyřadí.

Tabulka: Charakteristiky kolonií některých kvasinek na BIGGY agaru podle práce Yücesoy M a Marol S..

Zdroj: Yücesoy M, Marol S. Výkon CHROMAGAR candida a BIGGY agaru pro identifikaci druhů kvasinek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7

Reference

  1. Yücesoy M, Marol S. Výkon CHROMAGAR candida a BIGGY agaru pro identifikaci druhů kvasinek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
  2. MCD LAB. Technický list BIGGY Agar. Dostupné na: mcdlab.net/
  3. Laboratoř Neogen. VELKÝ agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. Laboratoře Conda Pronadisa. VELKÝ agar. K dispozici na: condalab.com
  5. BD Laboratories. BD BiGGY agar (kvasnicový agar s glycinem na bázi bismutu a glycinu). 2011. Dostupné na: bd.com

Zatím žádné komentáře