Čokoládový agarový základ, použití a příprava

3403
Charles McCarthy

The čokoládový agar Je to pevné, obohacené, neselektivní a nediferenciální kultivační médium. Používá se hlavně k izolaci náročných mikroorganismů z nutričního hlediska, přestože v nich mohou růst jakékoli druhy bakterií..

Proto se jeho užitečnost zvyšuje zejména při očkování vzorků, které jsou normálně sterilní, jako je mozkomíšní mok a kloubní tekutina. Je to také zahrnuto do zvolených prostředků pro setí polymikrobiálních vzorků, ale v těchto případech je nutné přidat antibiotika, která inhibují souběžnou flóru..

Čokoládový agar s růstem bakterií

Toto médium má charakteristickou hnědou barvu velmi podobnou čokoládě, odtud pochází i její název. Příprava je velmi podobná přípravě z krevního agaru, pouze v tomto případě musí být krev zahřátá, aby se červené krvinky mohly rozpadnout..

Jeho příprava, stejně jako krevní agar, je velmi choulostivá, protože je snadno kontaminovatelná. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří dává přednost získání tohoto média již připraveného komerčními společnostmi, které zaručují jeho kvalitu..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 použití
    • 2.1 Čokoládový agar připravený na agaru Columbia
    • 2.2 Čokoládový agar připravený s agarem na bázi GC (pro gonokoky)
    • 2.3 Čokoládový agar připravený na agaru Müeller Hinton
    • 2.4 Čokoládový agar připravený na agaru Thayer Martin
  • 3 Příprava
    • 3.1 Výpočty
    • 3.2 Zvažte a rozpusťte
    • 3.3 Sterilizujte
    • 3.4 Krevní agregace
    • 3.5 Další způsob přípravy čokoládového agaru bez použití krve
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Reference

Základ

Toto médium se skládá z agarové báze bohaté na živiny a zahřáté krve. Hemolýza červených krvinek poskytuje faktor X (hemin) a faktor V (NAD), které jsou nezbytné pro růst některých mikroorganismů, jako je rod Haemophilus. Je také velmi užitečné pro izolaci Neisserias sp.

Stejně jako krevní agar lze podle potřeby použít jako základní agar různá média. Mezi používaná média patří infuze do mozku a sójový agar tryptikáza, i když nejvíce doporučované jsou agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar a Thayer Martin agar..

Některé varianty čokoládového agaru zahrnují komerčně dostupný obohacený doplněk zvaný Isovitalex nebo Polivitex..

Tyto doplňky obsahují vitamin B.12, L-glutamin, adenin, hydrochlorid guaninu, kyselina p-aminobenzoová, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), thiamin pyrofosfát, dusičnan železitý, thiamin hydrochlorid, cystein hydrochlorid, L-cystin a glukóza.

Je důležité si uvědomit, že čokoládový agar je obohacenější než krevní agar, ale neumožňuje pozorovat hemolytické vzorce..

Aplikace

Zdroj: pixnio.com. Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Čokoládový agar připravený na agaru Columbia

Toto médium obsahuje pankreatický digest kaseinu a srdce, peptický digest masa, chlorid sodný, agar, kvasnicový extrakt a kukuřičný škrob. Je také bohatý na vitamíny, minerály a esenciální aminokyseliny.

Tato zahřátá krevní báze je ideální pro izolaci bakterií rodu Neisseria. Na druhou stranu, pokud se do média navíc přidá doplněk pro Brucellu, lze výše uvedený mikroorganismus izolovat. Výsledky se zlepšují pomocí koňské krve.

Čokoládový agar připravený s agarem na bázi GC (pro gonokoky)

Toto médium obsahuje peptony, kukuřičný škrob, monobazické a dibazické pufry, chlorid sodný a agar..

Většina komerčně připravených čokoládových agarových prezentací je dodávána s tímto základem a neobsahuje zahřátou krev, ale syntetickou směs heminu a chemický doplněk růstových faktorů, vitamínů, minerálů, aminokyselin, faktoru V a glukózy..

Čokoládový agar připravený na agaru Müeller Hinton

Používá se k provádění testování antimikrobiální citlivosti náročných mikroorganismů, jako jsou Streptococcus pneumoniae pomocí 5% zahřáté beraní krve.

Používá se také k primární izolaci Neisserias a Haemophilus, ale v konkrétním případě izolace Haemophilus Přednost se dává použití koňské krve, která je bohatým zdrojem faktorů X a V..

Na druhou stranu, pokud vzorek určený k výsevu pochází z nesterilní oblasti, doporučuje se přidání antibiotik, aby se potlačila normální flóra v dané oblasti..

Příklad pro vzorky dýchacích cest, u nichž existuje podezření na přítomnost bakterií rodu Haemophilus Bacitracin se používá k inhibici růstu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a saprofytické Neisserias.

V případě vzorků genitálního kanálu, u kterých je podezření Haemophilus ducreyi, Úspěšně byl použit čokoládový agar připravený následujícím způsobem: Müeller-Hintonův agar s 5% koňské krve po čokoládě, 1% obohacení Isovitalex a 3 µg / ml vankomycinu.

Čokoládový agar připravený na agaru Thayer Martin

Toto médium je speciální pro izolaci Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovat antibiotika k inhibici doprovodné flóry. Je použita jehněčí krev.

Příprava

Měli byste vidět indikace pro přípravu základního agaru, který se má použít. Nacházejí se na zadní straně nádoby s dehydratovaným médiem. Obecně popisují, kolik musíte vážit, abyste připravili litr kultivačního média.

V laboratoři lze připravit přesné potřebné množství, které může být více či méně než litr.

Výpočty

Pravidlo tří se používá k výpočtu, kolik vážit k přípravě požadovaného objemu. Příklad:

Pokud je pro 1 litr nutné vážit 40 ga laboratoř vyžaduje 800 ml, říká se:

1000 ml -40 g

800 ml - X

Vzorec bude následující:

X = 32 gr (množství, které se má zvážit na 800 ml).

Zvažte a rozpusťte

Potřebné množství se zváží a umístí do baňky s vodou.

Zahřejte na mírném ohni a jemně míchejte rotačními pohyby, dokud se dehydratované médium úplně nerozpustí, a nechejte ho vařit po dobu 1 minuty..

Sterilizovat

Baňka se umístí do autoklávu pro sterilizaci média při teplotě 121 ° C po dobu 20 minut..

Krevní agregát

Při opouštění autoklávu nechte odpočívat, dokud teplota média není přibližně mezi 56 až 70 ° C, aby se vložila krev, a míchejte, dokud médium nezhnědne..

Pokud přidáváte doplňky, je na čase to udělat. Následně promíchejte a naservírujte 20 ml do každé sterilní Petriho misky.

Celý postup by měl být proveden v digestoři s laminárním prouděním nebo kolem Bunsenova hořáku..

Necháme ztuhnout a uložíme převrácené v chladničce.

Další způsob, jak připravit čokoládový agar bez použití krve

Základní médium se připraví jak je popsáno výše, komerčně získaný dehydratovaný hemoglobin se rozpustí a sterilizuje v autoklávu..

Oba roztoky se nechají ochladit na 50 ° C, spojí se a přidá se doplněk. Míchejte za aseptických podmínek a poté podávejte ve sterilních Petriho miskách..

QA

Je důležité, aby krev byla umístěna na uvedenou teplotu, protože je ideální pro lýzu červených krvinek a zároveň pro udržení faktoru V, který je citlivý na teplotu..

Na povrchu agaru by neměly zůstat žádné bubliny. Z každé dávky 100 destiček by měla být jedna nebo dvě destičky inkubovány v sušárně při 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se zkontrolovala jejich sterilita..

Pro dosažení nejlepších výsledků použijte čokoládový agar krátce po přípravě..

Kontrolní bakteriální kmeny by měly být uchovávány v laboratoři, aby se vyhodnotila účinnost čerstvého média pro růst hlavních náročných mikroorganismů klinického významu..

Reference

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. Publikační služba UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Redakční Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Proveditelnost použití základního kultivačního média GC-Biocen Agar v mikrobiologické laboratoři. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Dostupné na: scielo.sld.
  5. Přispěvatelé z Wikipedie. Čokoládový agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. prosince 2018, 19:54 UTC. K dispozici na: en.wikipedia.org.

Zatím žádné komentáře