EMB založení agaru, příprava a použití

1943
Egbert Haynes

The EMB agar je selektivní a diferenciální pevné kultivační médium používané k izolaci gramnegativních bakterií, hlavně z čeledi Enterobacteriaceae, a dalších nenáročných gramnegativních bakterií. Je také známá pod zkratkou EAM, což je zkratka pro eosin-methylenovou modř..

Toto médium vytvořili Holt-Harris a Teague v roce 1916. Obsahuje pepton, laktózu, sacharózu, fosforečnan draselný, agar, eosin, methylenovou modř a vodu. Je velmi podobný agaru MacConkey, zvláště při použití Levine's Modified EMB Agar, který neobsahuje sacharózu.

Kovový lesk Escherichia coli na agaru EMB Zdroj: Carmen Moreno González [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], z Wikimedia Commons

Ve skutečnosti se každá laboratoř rozhodne, zda bude pracovat s jedním nebo druhým, protože plní stejnou funkci, i když biochemicky se liší..

Má dokonce stejnou nevýhodu jako klasický agar MacConkey, pokud jde o produkci roje rodu Proteus. Proto, aby se zabránilo tomuto jevu, může být koncentrace agaru zvýšena až o 5%..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1.1 Selektivní
    • 1.2 Diferenciál
  • 2 Příprava
  • 3 použití
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Závěrečné úvahy
  • 6 Reference

Základ

Selektivní

EMB agar je jemně selektivní, protože obsahuje anilinová barviva (eosin a methylenová modř), která působí jako inhibitory a brání růstu většiny grampozitivních bakterií a některých náročných gramnegativních tyčinek..

Tento agar má však tu nevýhodu, že některé grampozitivní bakterie mohou odolat přítomnosti inhibičních látek a růst jako malé bezbarvé přesné kolonie, jako je například Enterococcus faecalis a nějaký Staphylococcus.

Mohou také růst určité kvasinky, jako např Komplex Candida albicans, což dá velmi malé růžové kolonie. Chlamydospory se mohou z těchto kvasinek dokonce vyvinout, pokud je vzorek hluboce naočkovaný..

Rozdíl

Na druhé straně je EMB agar také diferenciálním médiem, protože tato barviva společně (eosin a methylenová modř) mají tu vlastnost, že při kyselém pH vytvářejí sraženinu, a proto slouží jako indikátory jeho produkce..

Slabé bakterie fermentující laktózu nebo sacharózu tedy produkují fialové kolonie během 24 až 48 hodin. Například rody Klebsiella, Enterobacter a Serratia.

Ty bakterie, které silně fermentují laktózu, jako např Escherichia coli, nebo jako sacharóza Yersinia enterocolitica nebo Proteus penneri, tvoří zelenočernou sraženinu, která u těchto druhů dodává charakteristický kovový lesk.

Je třeba poznamenat, že pokud je použito EMB levinové médium (bez sacharózy), Yersinia enterocolitica Y Proteus penneri vytvoří jasné kolonie.

Bakterie, které nefermentují laktózu nebo sacharózu, jsou vyživovány přítomností peptonů, které poskytují aminokyseliny a dusík nezbytné pro růst bakterií a vytvářejí čiré kolonie. Například rody Salmonella a Shigella, mimo jiné.

Stejně tak je důležité si uvědomit, že rod Acinetobacter může představovat kolonie levandulově modré, i když to není fermentor laktózy nebo sacharóza, ale má vlastnost fixovat methylenovou modř na své buněčné stěně. To se může stát i u jiných oxidačních bakterií.

Příprava

Původní dehydrované médium má světle béžovou barvu.

K přípravě tohoto kultivačního média se musí zvážit 36 ​​gramů dehydratovaného média a suspendovat v baňce obsahující jeden litr destilované vody..

Poté, co směs necháte 5 minut odpočívat, převeďte baňku na zdroj tepla a energicky a neustále ji míchejte, dokud se nerozvarí a úplně nerozpustí..

Následně musí být již rozpuštěné kultivační médium sterilizováno v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut..

Na konci času se vyjme z autoklávu a nechá se krátce odpočívat. Poté, ještě teplý (45-50 ° C), se do každé sterilní Petriho misky podává 15-20 ml agaru. Médium by mělo být lakmusově modré.

Po podávání jsou misky ponechány mírně odkryté, dokud agar mírně nevychladne. Poté se zakryjí a nechají úplně ztuhnout. Následně jsou objednány v obrácených držácích destiček a až do použití skladovány v chladničce (8 ° C)..

Tento postup se přednostně provádí v digestoři s laminárním prouděním nebo před Bunsenovým hořákem, aby se zabránilo kontaminaci.

Je důležité mít na paměti, že každý komerční dům uvede množství, které má být zváženo pro přípravu kultivačního média..

Konečné pH média musí být 7,2 ± 0,2

Aplikace

Toto médium se používá k výsevu moči a výkalů nebo jakéhokoli typu klinického vzorku, zejména je-li podezření na přítomnost nenáročných gramnegativních bacilů, jako jsou bacily patřící do čeledi Enterobacteriaceae, které na tomto médiu rostou velmi dobře..

Enteropatogenní bakterie rodů Shigella a Salmonella se vyznačují svými bezbarvými nebo slabě jantarovými koloniemi.

Rostou i jiné nelaktózové fermentující bacily, například Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Stejně tak je toto médium velmi užitečné při mikrobiologické analýze potravin a vody, protože je ideální pro úplnou potvrzovací fázi stanovení koliformních bakterií, tj. Pro potvrzení přítomnosti E-coli z kalných vývarů EC, z techniky nejpravděpodobnějšího čísla (MPN).

QA

Aby se ověřilo, že čerstvě připravené kultivační médium funguje dobře, lze vysadit kontrolní kmeny, aby se sledovaly vlastnosti kolonií a ověřilo se, že dávají podle očekávání..

K tomu kmeny ATCC nebo dobře identifikované kmeny E-coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa a některé grampozitivní bakterie, jako je S. aureus.

Očekává se to E-coli Vytvářejte dobře vyvinuté modravě černé kolonie se zeleným kovovým leskem. Zatímco, Enterobacter aerogenes Y Klebsiella sp měly by dávat dobře vyvinuté modročerné slizniční kolonie.

Pro jeho část, Salmonella typhimurium Y Shigella flexneri, by se měly vyvinout velké, bezbarvé nebo mírně jantarové kolonie.

Konečně žánr Pseudomonas aeruginosa roste jako bezbarvé kolonie nepravidelné velikosti, zatímco grampozitivní bakterie by měly být zcela inhibovány nebo růst řídce s velmi malými koloniemi.

Závěrečné myšlenky

Někdy sterilizace způsobí snížení methylenové modři, která má středně oranžovou barvu. Aby methylenová modř oxidovala a získala fialové zbarvení, musí se jemně míchat, dokud se barva nezjistí..

Po sterilizaci se také může barvivo vysrážet, proto musí být před podáním Petriho misky dobře promícháno..

Reference

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. 2009. Techniky pro mikrobiologickou analýzu potravin. 2. vyd. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Charakterizace a distribuce kmenů Escherichia coli Potenciálně patogenní Izolováno od brojlerových kuřat z drůbežích farem v Peru. Rev. vyšetřování. veterinář. Peru 2012 23 (2): 209-219. K dispozici na: scielo.org.
  3. Laboratorios Conda S.A. Eosin a agar s methylenovou modří. 2010. Dostupné na: condalab.com
  4. Britannia Laboratories. Levine E.M.B (With Eosin and Methylene Blue) 2011. Dostupné na: britanialab.com
  5. BD Laboratories. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modifikovaný. 2013. Dostupné na: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Redakční Panamericana S.A

Zatím žádné komentáře