Odůvodnění, příprava a použití sójového bujónu trypticaseinu

2460
Alexander Pearson

The tryptický sójový vývar Je to kapalné kultivační médium, vysoce výživné a neselektivní. Díky své velké univerzálnosti je to jedno z nejpoužívanějších kapalných kultivačních médií v mikrobiologické laboratoři..

Známý je také pod názvem tryptický sójový bujón nebo bujón natrávený kaseinem a sójou, jehož zkratka je v angličtině zkratka TSB. Tryptic am Vývar nebo CST pro jeho zkratku ve španělštině. Jeho použití je velmi rozmanité díky svému složení. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného, ​​fosforečnanu draselného a glukózy.

Sójový bujón tryptikasinu naočkovaný kmenem Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, kde je pozorována produkce pigmentu. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Je schopen reprodukovat klinicky důležité patogenní bakterie, včetně těch, které jsou nutričně náročné a anaerobní bakterie. V tomto prostředí se mohou také vyvinout některé oportunistické a kontaminující houby.

Vzhledem ke své vysoké nutriční síle má vysokou citlivost k detekci mikrobiální kontaminace, a proto byla vybrána Inspekční službou pro zdraví zvířat a rostlin USDA pro mikrobiologickou analýzu vakcín..

Podobně tryptikasinový sójový bujón splňuje požadavky různých lékopisů (evropský EP, japonský JP a severoamerický USP) pro mikrobiologické studium produktů na průmyslové úrovni, jako jsou kosmetika a potraviny..

Na druhou stranu stojí za zmínku, že i přes svou velkou užitečnost je toto médium relativně levné, takže je dostupné pro většinu mikrobiologických laboratoří. Je také velmi snadné se připravit.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 - Sójový bujón z trripticaseinu
    • 2.2 - Varianty sójového bujónu tryptikasinu
  • 3 Použijte
  • 4 zaseto
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Omezení
  • 7 Reference

Základ

Triptein, pepton a glukóza poskytují základní nutriční vlastnosti, aby se staly ideálním prostředkem pro rychlý mikrobiální růst.

Za přibližně 6 až 8 hodin inkubace je růst mikroorganismů již patrný. Existují však pomalu rostoucí kmeny, jejichž růst může trvat dny..

Chlorid sodný působí jako osmotická rovnováha a fosforečnan draselný jako regulátor pH. Přítomnost růstu je doložena výskytem zákalu v médiu; pokud nedojde k růstu, médium zůstane průsvitné.

Díky své světlé barvě je možné pozorovat produkci pigmentů, jako je například ten, který je zobrazen na obrázku na začátku článku, což odpovídá pigmentu produkovanému Pseudomonas aeruginosa. 

Příprava

-Sójový vývar tryptikasinu

K přípravě sójového bujónu tryptikázy musí být v digitálním měřítku zváženo 30 g dehydratovaného komerčního média. Poté se rozpustí v litru destilované vody obsažené v baňce.

Směs se nechá 5 minut odpočívat a poté se přenese do zdroje tepla, aby se médium pomohlo rozpustit. Mělo by se často míchat za varu po dobu 1 minuty.

Po rozpuštění se podle potřeby rozdělí do zkumavek vhodné velikosti. Lze použít trubky s bavlněnými zátkami nebo s bakelitovými čepičkami. Následně se zkumavky sterilizují médiem v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut..

Hodnota pH média musí zůstat na hodnotě 7,3 ± 0,2

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě od 10 do 35 ° C na suchém místě. Zatímco připravený vývar má světle jantarovou barvu a měl by být skladován v chladničce (2 až 8 ° C).

-Varianty sójového bujónu Trypticasein

Modifikovaný sójový bujón tryptikasinu lze připravit přidáním žlučových solí a novobiocinu, aby byl selektivní pro izolaci E-coli. Další možností pro stejný účel je příprava sójového bujónu tryptikázy doplněného vankomycinem, cefiximem a telluritem (2,5 µg / ml)..

Na druhou stranu lze do tryptického sójového bujónu přidat více glukózy (0,25%), pokud je cílem stimulovat tvorbu biofilmů..

Použití

Je dostatečně výživný, aby umožnil růst náročných nebo náročných bakterií, jako jsou Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp a Brucella sp, není třeba doplňovat krví nebo sérem.

Stejně tak se v tomto bujónu mohou vyvinout některé houby, například Komplex Candida albicans, Aspergillus sp a Histoplasma capsulatum.

Kromě toho je toto médium za anaerobních podmínek ideální pro izolaci bakterií rodu Clostridium, jakož i nesporulovaných anaerobních bakterií klinického významu..

Pokud je přidáno 6,5% chloridu sodného, ​​lze jej použít pro růst Enterococcus a dalších streptokoků skupiny D..

Na úrovni výzkumu to bylo velmi užitečné v různých protokolech, zejména při studiu biofilmu nebo bakterií tvořících biofilm. Používá se také k přípravě 0,5% bakteriální suspenze Mac Farland nezbytné k provedení antibiogramu metodou Kirby a Bauer..

V tomto případě se odebere 3 až 5 kolonií podobného vzhledu a emulgují se ve 4 až 5 ml sójového bujónu tryptikasinu. Potom se inkubuje po dobu 2 až 6 hodin při 35-37 ° C a následně se upraví na požadovanou koncentraci pomocí sterilního fyziologického roztoku. Sójové bujóny tryptikasinu by se neměly používat od 18 do 24 hodin inkubace.

Zaseto

Vzorek může být naočkován přímo nebo mohou být subkultivovány čisté kolonie odebrané ze selektivního média. Inokulum by mělo být malé, aby před inkubací médium nezakalilo.

Normálně se inkubuje při 37 ° C v aerobióze po dobu 24 hodin, ale tyto podmínky se mohou lišit v závislosti na hledaném mikroorganismu. V případě potřeby může být také inkubován za anaerobních podmínek při teplotě 37 ° C několik dní. Například u náročných nebo pomalu rostoucích mikroorganismů může být inkubován až 7 dní.

V mikrobiologické analýze farmaceutických látek - jako jsou vakcíny - jsou protokoly přísnější. V těchto případech se bujón bez růstu nezlikviduje, dokud nedosáhne 14 dnů nepřetržité inkubace..

QA

Z každé připravené dávky by měla být inkubována 1 nebo 2 neočkované zkumavky, aby se prokázala jejich sterilita. Musí zůstat beze změny.

Známé kmeny lze také vysadit, aby se vyhodnotilo jejich chování. Mezi kmeny, které lze použít, patří:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Zlatý stafylokok ATCC 6538 nebo 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý za podmínek vhodné atmosféry a teploty pro každý mikroorganismus..

Omezení

-Fermentace glukózy způsobuje pokles pH média v důsledku produkce kyselin. To může být nepříznivé pro přežití některých mikroorganismů citlivých na kyselost..

-Nedoporučuje se to udržovat kmeny, protože kromě kyselosti bakterie vyčerpávají živiny po několika dnech s následnou akumulací toxických látek, které činí prostředí nehostinným.

-Musíte pracovat a starat se o všechny protokoly sterility, protože bujóny jsou snadno kontaminovány.

-Po přípravě sójových bujónů tryptikasinu byste se neměli snažit přenést bujón do jiné sterilní zkumavky, protože tento typ manévru je velmi náchylný ke kontaminaci..

Reference

  1. Cona E. Podmínky pro dobrou studii citlivosti agarovým difúzním testem. Rev. chil. infikovat. 2002; 19 (2): 77-81. K dispozici na: scielo.org
  2. Britannia Laboratory. Tripteinový sójový vývar. 2015. Dostupné na: britanialab.com
  3. Laboratoř MCD. Sójový vývar Trypticasein. K dispozici na: electronic-systems.com
  4. Laboratoř Neogen. Triptych Sójový vývar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Vyhodnocení techniky magnetické imunoseparace pro získání Escherichia coli O157: H7 v těžkých krémech. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. K dispozici na: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tvorba biofilmu v izolátech Zlatý stafylokok podle antimikrobiální citlivosti a klinického původu. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Dostupné na: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolace Escherichia coli O157: H7 ve vzorcích výkalů dobytka s dvojím účelem z obce Miranda, stát Zulia, Venezuela. Reverend Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. K dispozici na: scielo.org

Zatím žádné komentáře