The střední Stuart Je to polotuhý agar nebo bujón bez živin, který se používá k přepravě biologických vzorků. Jeho účelem je udržovat kmeny přítomné ve vzorku životaschopné po určitou dobu, ale bez zvýšení mikrobiální populace.
To bylo vytvořeno Moffetem, Youngem a Stuartem v roce 1948 a později upraveno Toshachem a Patsula. Skládá se z glycerofosfátu sodného, thioglykolátu sodného, chloridu vápenatého a agar-agaru. Ten je přítomen v polotuhém médiu a chybí v kapalině. Některé laboratoře přidávají methylenovou modř.
Obvykle se používají, když není možné vzorek okamžitě zasít. V tomto případě je vzorek umístěn do transportního média, zatímco je přenesen do laboratoře, která bude kulturu zpracovávat..
Tímto způsobem je zaručeno, že přítomné mikroorganismy zůstanou naživu, dokud nebudou naočkovány do odpovídajícího kultivačního média..
Zpočátku bylo jeho použití určeno k přepravě uretrálních nebo vaginálních vzorků tam, kde byla přítomnost Neisseria gonorrhoeae. Později si uvědomili, že jeho užitečnost může být širší.
Bylo zjištěno, že médium Stuart je velmi účinné při zachování labilních a náročných mikroorganismů, jako jsou Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertussis, mezi ostatními. Kromě dalších neobtěžujících mikroorganismů, jako jsou Enterobacteria.
Stuartovo médium se v zásadě vyhýbá vysychání vzorku, udržuje osmotickou rovnováhu a udržuje mikroorganismy v ideálním pH. Na druhé straně strategicky toto médium neobsahuje živiny, čímž brání množení mikroorganismů.
Na trhu existují speciální přepravní zařízení vzorků, která obsahují tento nebo jiný dopravní prostředek, nazývaný culturette. Mohou být také připraveny v laboratoři.
Rejstřík článků
Účelem dopravních prostředků Stuart je udržovat vzorky co nejblíže jejich původnímu stavu, dokud nebudou zpracovány..
Glycerofosforečnan sodný a chlorid vápenatý je pufrovací systém, který funguje udržováním pH a osmolarity..
Mezitím působí thioglykolát sodný jako redukční činidlo a v případě, že obsahuje agar, dává mu polotuhou konzistenci, která zpomaluje okysličování média. Nakonec je methylenová modř indikátorem oxidace, to znamená, že detekuje přítomnost kyslíku.
Polotuhé médium s redox indikátorem je ideální pro přepravu vzorků tam, kde je podezření na přítomnost anaerobních bakterií.
Stuartovo médium, stejně jako všechny dopravní prostředky, splňuje určité vlastnosti, včetně:
-Udržuje přítomné životaschopné mikrobiální kmeny bez násobení.
-Neobsahuje žádné živiny; Jeho sloučeniny jsou zaměřeny na udržení vzorku hydratovaného za odpovídajících podmínek pH a osmolarity.
-Inhibuje autolyzát některých choulostivých mikroorganismů, jako je například Pneumococcus.
-Jeho použití je dočasné, nemělo by se příliš prodlužovat.
Glycerofosforečnan sodný 10 g
Thioglykolát sodný 1,0 g
Chlorid vápenatý 0,1 g
Methylenová modř 0,002 g
Agar-agar 3 gr
Destilovaná voda 1 l
Smíchejte komponenty a zahřejte, dokud se úplně nerozpustí. Nalijte do zkumavek nebo speciálních tamponů. Jsou zavedeny do autoklávu a sterilizovány při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Zkumavky nechte vychladnout ve svislé poloze (ve tvaru zátky). Uchovávejte při pokojové teplotě.
Odvážit 14,1 g média v 1 litru destilované vody. Často míchejte, dokud se úplně nerozpustí, může být vařeno. Zbytek postupu, jak již bylo popsáno.
Dehydratované médium je krémově zbarvené a připravené by mělo být na svém povrchu modré. To je způsobeno přítomností methylenové modři.
PH média musí být upraveno na 7,4 ± 0,2
Složení
Glycerofosforečnan sodný 10 g
Thioglykolát sodný 1 g
Chlorid vápenatý dihydrát 0,1 g
Destilovaná voda 1000 ml
Má stejné přísady jako polotuhá látka, ale nemá agar ani methylenovou modř. V tomto případě se složky smíchají bez zahřívání a 0,5 ml se rozdělí do zkumavek 16 x 125 mm se šroubovými uzávěry..
Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 10 minut. Pro odběr vzorků by se měly použít dakronové výtěry, pokud je vzorek pro PCR nebo umělý hedváb, pokud je to pro kultivaci.
Zkumavky se skladují při pokojové teplotě.
Komerčně existují speciální zařízení pro transport vzorků nazývaná culturette; Toto zařízení je podlouhlá a tenká trubice, která má uvnitř tampon a na konci je segment, který obsahuje polotuhé nebo tekuté Stuartovo médium.
Zařízení se otevře a vzorek se odebere tamponem. Poté se zavádí zpět do tuby, dokud není špička tamponu vložena do polotuhého transportního média; některé přinášejí polyurethanovou houbu impregnovanou kapalným Stuartovým médiem, kterým je vzorek uchován vlhkým.
V případě podezření na přítomnost choulostivých mikroorganismů by měly být k odběru vzorku použity bavlněné tampony s aktivním uhlím..
Vzorky, které lze odebrat tampony nebo tampony a přenést na toto médium, jsou faryngeální exsudáty, rektální tampony a různé sekrece, včetně vaginálních, uretrálních, rán, očí, uší a abscesů..
Během přenosu vzorku v transportním médiu do laboratoře je třeba se vyhnout vystavení média extrémním podmínkám prostředí (příliš chladnému nebo příliš horkému). Rovněž je třeba se vyhnout náhlým změnám atmosférického tlaku.
Doba, po kterou je médium schopné udržet životaschopnost mikroorganismu, bude záviset na daném kmeni. Například u mikroorganismů rodu Neisserias a Haemophilus mohou zůstat životaschopné až 24 hodin, ale kmeny jako Salmonella nebo Shigella mohou trvat dny i týdny..
Pokud se odhaduje, že zpracování vzorku může trvat déle než 4 dny, je lepší zmrazit vzorek na -70 ° C.
Připravený dopravní prostředek nebo obchodní kultura musí mít štítek, na kterém budou umístěny následující informace:
Jméno a příjmení pacienta: vyhněte se záměně vzorků.
Identifikační číslo: je vhodné udržovat pořádek v práci.
Zdroj odběru vzorků: pomáhá bakteriologovi vybrat vhodné kultivační médium.
Ošetřující lékař: Někdy je to nutné pro případné konzultace.
Datum a čas odběru vzorků: Je to nezbytné pro přijetí nebo odmítnutí vzorku podle doby, která uplynula mezi odběrem vzorku a jeho přijetím v laboratoři..
Další informace, které by bylo velmi užitečné přiložit, jsou:
Předpokládaná diagnóza: průvodci přidáním speciálních kultivačních médií podle diagnostického podezření.
Antibiotická léčba: je užitečné připojit se k antibiogramu.
Všechny tyto informace jsou zásadní pro zajištění dobrého zpracování vzorku..
K vyhodnocení účinnosti média Stuart lze naočkovat známé kmeny a udržovat je na 25 ° C, například: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.
Ve všech případech se očekává, že se dotyčný mikroorganismus obnoví a uchová se po dobu 24 hodin..
Na druhou stranu lze použít i jiné kmeny, jako například: Shigella flexneri ATCC 12022, Zlatý stafylokok ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Escherichia coli ATCC 11775.
Ve všech případech se očekává hojné zotavení po dobu až 96 hodin..
Některé studie zajišťují, že glycerofosfát přítomný v médiu Stuart může být metabolizován některými koliformními bakteriemi, mimo jiné gramnegativními bakteriemi, a proto se v tomto médiu množí..
Toto riziko se zvyšuje, čím déle je zpoždění zpracování vzorku. Podobně to ovlivňuje vystavení média Stuart vysokým teplotám během jeho přenosu.
Zatím žádné komentáře