Xanthoproteinová reakce zdůvodnění, postup, použití

932
Philip Kelley
Xanthoproteinová reakce zdůvodnění, postup, použití

The xantoproteinová reakce je chemický postup používaný ke stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti aromatických aminokyselin, jako je tyrosin a tryptofan, které mohou být ve volné formě nebo tvoří rozpustné proteiny, peptidy nebo polypeptidy.

Používá se také k detekci toxických látek v krvi, které ve své struktuře obsahují benzenovou skupinu. Tento test je také známý jako xanthoproteinová Becherova reakce..

Pozitivní reakce na xantoproteiny Zdroj: Převzato z videa: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Xanthoproteinová reakce využívá koncentrovanou kyselinu dusičnou, teplo a neutralizující alkálie. Pokud se roztok při neutralizaci reakce změní ze žluté na oranžovou, je test považován za pozitivní. Pozorované zbarvení je způsobeno tvorbou dusíkatých sloučenin odvozených z nitrifikace benzenových skupin.

Pokud je třeba kvantifikovat množství celkového proteinu, je nutné použít jiné metody stanovení proteinu, například Biuret..

Xanthoproteinová reakce se používá hlavně při analýze látek, jejichž chemické složení není známo. Tato reakce je obvykle součástí souboru testů, které pomohou určit chemické složení konkrétní látky nebo extraktu. Proto je výzkumníky široce používán.

Na druhé straně se Becherova xanthoproteinová reakce používá k detekci fenolických a indolových látek v krvi, což umožňuje předvídat výskyt nefropatie, než se zvýší další pozdější parametry..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Postup
    • 2.1 - Xanthoproteinová reakce pro detekci aminokyselin s aromatickými skupinami
    • 2.2 - Xanthoproteinová reakce k detekci fenolických a indolových látek v krvi
  • 3 Použijte
  • 4 Bezpečnostní opatření
  • 5 Reference

Základ

Reakce v podstatě detekuje přítomnost benzenové skupiny, a to jak v aminokyselinách, tak v proteinech a peptidech. Kyselina dusičná působí na benzenový kruh aminokyselin, které ji obsahují, a tvoří fenolové nitrosloučeniny.

Reakce vyžaduje provedení tepla, obvykle se vytvoří sraženina, která zakalí médium a změní jej na mléčnou. Sraženina může být bílá nebo žlutá. Nakonec to vyžaduje krok alkalizace, který zvýrazní barvu. K tomu se používá báze, jako je 40% hydroxid sodný nebo amoniak..

Reakce bude interpretována jako pozitivní, pokud je během zahřívacího procesu pozorováno silné žluté zbarvení nebo tmavě oranžové, když se reakce alkalizuje. Detekované aminokyseliny jsou hlavně tyrosin a tryptofan.

Xanthoproteinová reakce. Zdroj: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

V případě fenylalaninu, i když se jedná o aromatickou aminokyselinu, je obtížné nitrovat benzenové jádro této aminokyseliny jednoduchou reakcí, proto bude vydávat buď negativní, nebo slabou pozitivní reakci.

Obecně lze xanthoproteinový test doplnit testem Hopkins-Cole, který se používá ke specifické identifikaci tryptofanu. Pokud je xanthoproteinový test pozitivní a Hopkinsův-Coleův test negativní, je přítomnost tryptofanu v tomto roztoku vyloučena, což ukazuje na přítomnost hlavně tyrosinu. Podobně jej lze mimo jiné doplnit Millonovou reakcí pro detekci tyrosinu..

Tuto reakci lze také použít na vzorky krve, plazmy nebo desalbuminovaného séra pro diagnostiku uremie nebo selhání ledvin. V tomto případě se hledá detekce toxických látek (fenolických a indolových) produkovaných střevním hnilobou..

Tyto látky mají benzenovou skupinu, a proto poskytují pozitivní xantoproteinovou reakci, i když reagující látka není ani aminokyselina, ani protein..

Proces

- Xanthoproteinová reakce pro detekci aminokyselin s aromatickými skupinami

Vložte 1 ml testovaného vzorku do čisté a suché zkumavky.

-Přidá se 0,5 ml koncentrované kyseliny dusičné.

-Směs se inkubuje ve vodní lázni při 70 ° C po dobu 2 minut. Dříve připravte vodní lázeň při uvedené teplotě.

-Při vyjímání zkumavky z vodní lázně je možné pozorovat, že se roztok stal mléčným a získal určitou žlutavě bílou barvu..

-Roztok se ochladí kapáním studené vody na dno trubice..

-Přípravek se zalkalizuje pomalým přidáváním (po kapkách) 40% roztoku hydroxidu sodného, ​​dokud nedojde ke změně barvy.

-Pokud je test pozitivní, vytvoří se na rozhraní kapalin tmavě oranžový kruh..

-Pokud je reakce negativní, nedojde k žádné barevné tvorbě.

- Xanthoproteinová reakce k detekci fenolických a indolových látek v krvi

-Nanášejte 5 ml 20% kyseliny trichloroctové na 5 ml venózní krve, plazmy nebo séra, přičemž posledně uvedené je nejvíce indikováno. Dobře promíchejte a přefiltrujte.

-Vezmou se 2 ml filtrátu a smísí se s 0,5 ml kyseliny dusičné. Poté se zahřeje k varu, z tohoto důvodu se trubice umístí přímo nad lehčí plamen na 30 sekund. Ochladí se vodou a přidá se 1,5% 33% chloridu sodného..

Vykládá se takto:

-Negativní výsledek: nažloutlá barva.

-Pozitivní výsledek (+) citronově žlutá.

-(++) zlatožlutá.

-(+++) tmavě žlutá až hnědá

Lze jej také interpretovat pomocí referenční autenrietské kolorimetrické stupnice, která se skládá z různých koncentrací dichromanu draselného. To je připraveno v 10 v 10 ředěních z 0,03874% zásobního roztoku. Každá zkumavka představuje procento.

Interpretační stupnice

Existují dvě stupnice interpretace zvané starověká a moderní. Normální hodnoty jsou:

Starý stůl: mezi 75 až 85%

Moderní stůl: mezi 15 až 25%

Pokud je barva zkumavky uprostřed dvou standardních zkumavek, mezi oběma měřeními se vytvoří průměr.

Standardní roztok dichromanu draselného se připraví následujícím způsobem: Změří se 7,9 ml 10 N dichromanu draselného a doplní se na 100 ml v odměrné baňce. Pro ředění postupujte podle kolorimetrické tabulky Autenrieth..

Autenrieth kolorimetrická tabulka. Zdroj: Vásquez A. Xanthoproteinová reakce. Španělský klinický deník. 1949; 35 (5): 326-327. Dostupné na: Elsevier

Použití

Použití xantoproteinové reakce je součástí souboru biochemických testů, které pomáhají znát chemické složení nějaké neznámé látky. Tento test přispívá k chemické analýze detekce proteinů, které ve své struktuře obsahují benzenové skupiny..

Tuto reakci široce využívají vědci v různých studiích sledovaných látek..

V tomto smyslu Vásquez-Jorge a spolupracovníci použili tuto a další reakce ke zkoumání obsahu bílkovin v tekutinách extrahovaných z ústřic mangrovových. (Crassostrea rhizophorae).

Podobně Rojas et al. (2009) použili k analýze glykomakropeptidů v sraženinách ricotty syrovátky řadu testů, včetně reakce xanthoproteinu..

Na druhou stranu, Becherova xanthoproteinová reakce byla modifikována Volhardem, aby byla použita pro jiné účely. V tomto případě pro detekci fenolických a indolových látek, které mohou růst mnohem dříve (týdny nebo měsíce), než se zvýší hladina močoviny a zbytkového dusíku v krvi..

Tyto toxické odpady vznikají z trávicího hniloby potravin.

Tyto látky se hromadí v krvi, pokud nejsou správně eliminovány, proto může pozitivní test na xantoproteiny předpovědět časný nástup vlastního selhání ledvin nebo stav uremie..

V závislosti na intenzitě barvy můžete určit, jak je pokročilá. V tomto případě je test kvantitativní.

U zdravých lidí dává tento test slabě žluté zabarvení odpovídající normální hladině tryptofanu a tyrosinu, které mohou být v krvi.

Zatímco u pacientů s ledvinami je xanthoproteinová reakce silně pozitivní díky přítomnosti následujících látek: mimo jiné fenol, indol, parakresol, aromatické oxykyseliny.

Opatření

Tato zkouška musí být provedena vyškolenými odborníky. Je třeba vzít v úvahu všechny předpisy o biologické bezpečnosti, protože používanými činidly jsou korozivní kyseliny a zásady..

Pokud náhodou spadne několik kapek kyseliny dusičné na kůži nebo na nehty, zožltnou, protože obě struktury obsahují bílkoviny. Kromě toho způsobuje na pokožce a sliznicích těžké popáleniny.

Dojde-li ke kontaktu s pokožkou, mělo by se postupovat podle toho, že je třeba místo okamžitě umýt mýdlem a vodou po dobu přibližně 20 minut..

Pokud vystříkne do očí, měl by se umýt velkým množstvím čerstvé vody a snažit se mít oči otevřené..

Reference

  1. „Xanthoproteinová reakce“ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2. září 2019, 17:49 UTC. 21. října 2019, 20:31 wikipedia.org/
  2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Fyzikálně-chemická charakterizace a obsah bílkovin v tekutých výtažcích z mangrovových ústřic (Crassostrea rhizophorae). Kubánský rev chemie, 2014; 26 (1): 66-74. K dispozici v Redalyc.
  3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Izolace a výkon GMP srážením syrovátky kyselinou trichloroctovou. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Dostupné v: ve.scielo.
  4. Vásquez A. Xanthoproteinová reakce. Španělský klinický deník. 1949; 35 (5): 326-327. Dostupné na: Elsevier
  5. Gálvez I, Gárate O. Becher a Andrewes reakce v močové chirurgii. Urologická služba španělské nemocnice. Argentinský urologický deník 395-404

Zatím žádné komentáře