The barvení tobolek je technika diferenciálního barvení, která má tu vlastnost, že zvýrazňuje polysacharidovou strukturu, která obklopuje určité bakterie a kvasinky nazývané kapsle. Používá se v klinických laboratořích k diagnostice určitých patologií způsobených kapslovanými mikroorganismy..
Používá se také ve výukových laboratořích k demonstraci této morfologické struktury studentům kariéry ve zdravotnictví, jako jsou: medicína, bioanalýza, ošetřovatelství nebo cytotechnologie..
Existuje několik jednoduchých technik k prokázání přítomnosti kapsle v mikroorganismech, které ji vlastní, jsou to: negativní skvrna, Anthonyova skvrna a varianta, která kombinuje předchozí dvě.
Negativní barvení se používá hlavně ve vzorcích mozkomíšního moku, když existuje podezření na přítomnost kvasinek. Cryptococcus neoformans. Tato droždí je běžnou příčinou meningitidy.
Tato technika používá nigrosin nebo indický inkoust a je založena na vytvoření kontrastu mezi pozadím přípravku a neproniknutelnou tobolkou mikroorganismu. Pozadí ztmavne a tobolka je bezbarvá. Tímto způsobem je tato struktura zvýrazněna.
Pokud jde o techniku Anthony, lze říci, že se většinou používá ve výukových laboratořích k prokázání polysacharidové struktury v bakteriích, jako jsou Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.
Použití této techniky pro diagnostické účely je velmi vzácné, protože existují další rutinní testy, které umožňují identifikaci těchto mikroorganismů..
Rejstřík článků
Tobolka má silnou strukturu polysacharidové povahy. Chrání mikroorganismy před fagocytózou, a proto je obtížné do nich proniknout.
Proto jsou skvrny kapslí založeny na kontrastu. Barviva zbarvují dno přípravku, zatímco kapsle zůstává bezbarvá.
Díky těmto technikám je proto kapsle snadno rozpoznatelná. Pokud mikroorganismus nemá tobolku, nebude s tímto typem zbarvení rozlišitelný, protože vše bude obarveno stejnou barvou..
Všechny techniky používané k barvení tobolek mají stejné důvody, přestože používají různá barviva a postupy..
Anthonyova skvrna používá jako skvrnu křišťálově fialovou. Tím se zabarví bakteriální tělo a pozadí na fialově.
Na druhé straně se používá 20% síranu měďnatého. Slouží jako promývací roztok, to znamená, že odstraňuje přebytečný fialový krystal z přípravku, čímž jsou tobolky čiré, ale beze ztráty barvy bakteriálního těla nebo pozadí..
- Duhové mléko.
- Mikroskopický sklíčko.
- 1% fialový krystal.
- 20% síran měďnatý.
- Optický mikroskop.
- Ponorný olej.
Tato technika se skládá z:
Je důležité nepoužívat teplo ani k fixaci, ani k sušení, protože by to poškodilo kapsli. Také se nemyjte vodou.
Iridescentní mléko je vynikající kultivační médium, protože poskytuje živiny nezbytné pro vývoj mikroorganismu ve významné tobolce.
Na druhé straně bude duhové mléko tvořit silné a kompaktní dno, které bude obarveno fialově spolu s bakteriálním tělem, ale kapsle, která obklopuje mikroorganismus, zůstane bezbarvá. Proto je kolem bakteriálního těla pozorována jasná halo..
Je to jednoduchá technika. Není nutné žádné upevnění.
Podobně je třeba poznamenat, že lze použít i jiné kultivační médium, ale výhodné je mléčné médium, protože má tu výhodu, že poskytuje výraznější kapsle..
Je to o něco pracnější technika než negativní barvení a její vizualizace vyžaduje čekání na úplné zaschnutí přípravku..
- Mikroskopická sklíčka.
- Kultivační médium s mikroorganismem.
- Čínský inkoust nebo nigrosin.
- Optický mikroskop.
- Fyziologický solný roztok.
Umístěte kapku fyziologického roztoku na krycí sklíčko a rozpusťte malou část mikrobiální kultury. Je důležité, aby přípravek nebyl příliš hustý. Poté vložte kapku čínského inkoustu nebo nigrosinu a promíchejte.
Poté se na přípravek položí krycí sklíčko, aniž by kapalina přetékala. Pozoruje se pod mikroskopem nejprve zaostřením na objektiv 10X a poté přesunutím na objektiv 40X.
Tuto techniku lze také použít přímo na vzorky CSF. To znamená, že místo umístění kapky mikrobiální kultury se umístí kapka CSF.
Jedná se o jednoduchý způsob provádění a zároveň levný. Nevyžaduje fixaci nebo vysušení přípravku.
Má tu nevýhodu, že musí být pozorována pod mikroskopem, než přípravek zaschne, protože pokud k tomu dojde, mikroorganismy se stáhnou, což znesnadní vizualizaci..
Na druhou stranu může dojít k falešným pozitivům, pokud je analytik nezkušený, protože leukocyty jsou často zaměňovány s kvasinkami..
Pozorování kvasnicových tobolek technikou čínského inkoustu nebo nigrosinu by mělo být považováno za předpokládanou diagnózu Cryptococcus neoformans dokud se to neukáže s kulturou.
Je to proto, že existují další kvasinky, které by mohly být příčinou meningitidy, nejen Cryptococcus neoformans, jako jsou rody Candida a Rhodotorula, stejně jako další druhy Cryptococcus.
Pokud existují uzavřené mikroorganismy, bude pozorováno tmavé pozadí s průhlednými tělesy plovoucími v kapalině, což zvýrazní přítomnost kapsle..
Tuto techniku lze také provést s nigrosinem. Jedná se o kombinaci dříve vysvětlených technik. Tato technika používá křišťálově fialovou barvu a indický inkoust nebo nigrosin.
Bakteriální tělo se zbarví fialově od krystalové fialové, protože je záporně nabité, zatímco nigrosin zbarví spodní část nátěru. Pokud má bakterie tobolku, bude kolem mikroorganismu vypadat jako průhledná halo..
Křišťálovou fialovou lze nahradit kteroukoli z těchto barev: safranin, základní fuchsin nebo methylenová modř.
- Fialové sklo.
- Nigrosinový nebo indický inkoust.
- Mikroskopická sklíčka.
- Mikroskop.
- Kultivujte mikroorganismus v kultivačním médiu.
- Na konec sklíčka položte kapku kultury a vedle ní kapku krystalového indického inkoustu nebo nigrosinu, promíchejte a natřete koncem dalšího sklíčka..
- Sušte na vzduchu a neohřívejte.
- Zakryjte roztokem křišťálově fialové po dobu 1 minuty, omyjte destilovanou vodou, ale velmi jemně (jemným proudem), nechte uschnout na vzduchu.
- Pozorujte pod mikroskopem s ponorným objektivem. Hledejte na konci spreadu.
Uvidíte fialové zbarvené bakteriální tělo a tmavé pozadí. Kapsle, pokud je přítomna, bude kolem bakterií vypadat bezbarvá.
Zatím žádné komentáře