Příprava a použití agaru z kukuřičné mouky

2120
Egbert Haynes
Příprava a použití agaru z kukuřičné mouky

The agar z kukuřičné mouky je pevné kultivační médium s nízkou nutriční schopností, vhodné pro subkultivaci určitých hub a pro demonstraci chlamydospór v kmenech komplexu Candida albicans. V angličtině je známý jako kukuřičný agar.

Konvenční médium kukuřičné mouky má velmi jednoduché složení, obsahuje kukuřičnou mouku, agar-agar a vodu. Díky nízké nutriční hladině je ideální pro středně dlouhou dobu udržování kmenů hub, zejména černých hub..

A. Grafické znázornění komplexu Candida albicans na agaru z kukuřičné mouky. B. Chlamydospory Candida albicans Komplex pozorovaný pod mikroskopem, vytvořený na agaru kukuřičné mouky. Zdroj: A. GrahamColm [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)♡/By: CDC / Dr. William Kaplan, s laskavým svolením: Knihovna obrázků veřejného zdraví.

Sporulace komplexu Candida albicans je v tomto médiu výhodné, pokud se během přípravy agaru přidá 1% Tween 80. Tvorba chlamydospór je charakteristická pro tento druh a prakticky jediný ovlivňuje člověka..

Existují i ​​jiné druhy, které tvoří chlamydospory, ale je nepravděpodobné, že by ovlivnily člověka, jako např Candida australis, přítomné v trusu tučňáků nebo C. clausenii, což je zřídka nalezený saprofyt. Stejně tak výjimečně druh C. stellatoidea Y C. tropicalis mohl je zformovat.

Na druhé straně přidání glukózy do média kukuřičné mouky podporuje tvorbu pigmentů v kmenech Trichophytom rubrum.

Je důležité si uvědomit, že existují houby, které na agaru kukuřičné mouky netvoří hyfy nebo pseudohyfy, jako například Cryptococcus neoformans, odlišující se od jiných žánrů.

Agar z kukuřičné mouky lze připravit v laboratoři nebo lze použít také komerční média..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Příprava
    • 2.1 Obchodní agar z kukuřičné mouky
    • 2.2 Agar z kukuřičné mouky s Tween 80
    • 2.3 Agar z kukuřičné mouky s glukózou
  • 3 Použijte
    • 3.1 Výsev
    • 3.2 Demonstrace chlamydospór
    • 3.3 Údržba kmenů hub
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Kukuřičná mouka je substrát, agar je tuhnoucí činidlo a voda je rozpouštědlo..

Agar z kukuřičné mouky lze doplnit doplněním 80 (sorbitan monooleát nebo polysorbát polyester 80). Tato sloučenina snižuje povrchové napětí média díky své emulgační síle.

Vytváří také nepřátelské prostředí, které inhibuje přehnané množení buněk a stimuluje růst hyf, což také upřednostňuje produkci chlamydospór; druhý uvažoval o strukturách odporu. Tato struktura pomáhá při identifikaci druhů Candida albicans.

Glukóza v tomto médiu zvyšuje svoji schopnost tvořit pigment u některých hub..

Je třeba poznamenat, že kukuřičná mouka se střední glukózou neslouží k prokázání chlamydospór v cKomplex Candida albicans.

Příprava

Domácí agar z kukuřičné mouky

Naváží se 47 g žluté kukuřičné mouky a rozpustí se v 500 ml destilované vody. Zahřejte na 60 ° C za stálého míchání po dobu přibližně 1 hodiny. Poté přefiltrujte přes kousek gázy a bavlny, případně jej můžete znovu filtrovat průchodem přípravku filtračním papírem Whatman č. 2.

Doplňte objem na 1 000 ml destilovanou vodou. Přidejte 17 g agaru a agaru a zahřívejte, dokud se nerozpustí. Autoklávujte 15 minut při 121 ° C.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Uchovávejte v lednici.

Barva připraveného média je bělavá s hrudkovitým vzhledem.

Chcete-li připravit kukuřičnou mouku s glukózou na výše popsaný přípravek, přidejte 10 g glukózy.

Komerční agar z kukuřičné mouky

Naváží se 17 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs může být zahřátá jemným třepáním, aby se úplně rozpustila. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C, 15 lb, po dobu 15 minut.

Nalijte do sterilních Petriho misek. Necháme ztuhnout. Obraťte a uchovávejte v chladničce až do použití. Před použitím temperujte.

Hodnota pH by měla být 6,0 ± 0,2 při 25 ° C.

Agar z kukuřičné mouky s Tween 80

Aby vyhovoval normě ISO 18416, musí být agar z kukuřičné mouky připraven následujícím způsobem:

Odvažte 65 gramů na litr a přidejte 10 ml Tween 80. Zahřívejte a vařte několik minut, dokud se nerozpustí, přičemž dávejte pozor, abyste se příliš nepřehřáli. Sterilizujte při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut.

Agar z kukuřičné mouky s glukózou

Zvýšení chromogenní síly kolonií Trichophyton rubrum a odlišit je od T. mentagrophytes, K původnímu vzorci lze přidat 0,2% glukózy. Nemusíte mít Tween 80, protože glukóza inhibuje tvorbu chlamydospór.

Použití

Především je použití agaru z kukuřičné mouky určeno ke studiu kmenů Candida a napomáhá jejich identifikaci prostřednictvím charakteristického pozorování chlamydospór u druhů albicans. To znamená, že použití tohoto agaru slouží jako pomocná metoda identifikace těchto kvasinek..

Na tomto agaru se mohou vyvinout saprofytické i patogenní druhy, ale každý z nich vytváří charakteristické myceliální struktury. Například druhy rodu Torulopsis neprodukují mycelium a množí se pouze blastokonidiemi..

Podobně druhy Trichosporon a Geotrichum produkují na agaru kukuřičné mouky arthroconidia a je někdy obtížné rozlišovat mezi jedním a druhým..

Arthroconidia rodu Geotrichum produkují prodloužení hyf připomínající hokejku..

Při identifikaci je také užitečná výroba pigmentů pomocí agaru z kukuřičné mouky doplněného glukózou Trichophytom rubrum.

Zaseto

Podezřelé kolonie Candida získané v primárním kultivačním médiu - agaru Sabouraud - z klinických vzorků, kosmetiky, půdy, mimo jiné, jsou subkultivovány na agaru kukuřičné mouky. Médium se naočkuje a inkubuje při 22 ° C po dobu 24 až 48 hodin. V případě potřeby lze inkubační dobu prodloužit.

Chlamydospore demonstrace

Za tímto účelem musí být agar z kukuřičné mouky Tween 80 naočkován pomocí techniky Dalmau. Tato metoda spočívá v odebrání části podezřelé kolonie platinovou rukojetí a provedení tří paralelních řezů ve středu, přičemž rukojeť se udržuje na 45 °. Řezy musí být od sebe vzdáleny 1 cm.

Následně se na zaseté pruhy umístí dříve plamený krycí předmět, takže polovina je zakryta a druhá je odkryta.

Inkubujte naočkované destičky při 30 ° C po dobu 48-72 hodin a poté mikroskopicky zkontrolujte přes krycí sklíčko..

Údržba kmenů hub

Za účelem udržování kmenů se naočkované a vypěstované plotny skladují v chladničce (4 až 8 ° C). Tímto způsobem mohou trvat několik týdnů a mohou být použity pro účely výuky nebo výzkumu..

QA

Pro kontrolu sterility se destička inkubuje bez inokulace při teplotě místnosti, předpokládá se, že nedojde k žádnému růstu ani změně barvy.

Pro kontrolu kvality jsou známé kmeny jako: Zlatý stafylokok, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Očekávané výsledky jsou částečná inhibice pro S. aureus Y E-coli. U ostatních kmenů se sice očekává uspokojivý růst.

Aspergillus niger roste s černými a sporulovanými koloniemi v přibližné době 5 dnů inkubace.

Candida albicans kvasinkové kolonie s produkcí chlamydospór.

Saccharomyces cerevisiae produkují velké kvasinkové buňky.

Omezení

Ve spodní části destičky se vytvoří žlutá sraženina, kterou nelze zaměňovat s koloniemi..

Reference

  1. Neogen Laboratories. Agar z kukuřičné mouky. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com.
  2. Kulturní média Microkit. Agar z kukuřičné mouky. K dispozici na: Medioscultivo.com.
  3. Linares M, Průvodce identifikací kvasinek Solís F. K dispozici na adrese: http: //www.guia.revibero.
  4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Veřejné zdraví, 2002; 19 (4): 206-208. K dispozici na: Scielo.com
  5. Casas-Rincón G. Obecná mykologie. 1994. 2. vydání, Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vyd. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  8. Castillo E. Srovnávací studie některých makroskopických a mikroskopických metod pro izolaci a rozpoznávání rodu Candida. Colombian Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Dostupné na: Ciencias.unal.edu.co

Zatím žádné komentáře