Základ živinového agaru, příprava a použití

3431
Jonah Lester

The živný agar Je to pevné neselektivní a nediferenciální kultivační médium. V tomto médiu rostou všechny druhy bakterií, které nejsou náročné na výživu..

Je to jednoduché médium a navzdory svému názvu obsahuje nižší nutriční hodnotu ve srovnání s jinými podobnými médii, jako je Brain Heart Infusion Agar nebo Trypticase Soy Agar..

Počet kolonií na živném agaru

Jeho užitečnost v laboratoři je velmi různorodá. Používá se hlavně pro subkulturu druhů, udržování kmenů, počítání kolonií, mimo jiné jako základ pro přípravu krevního agaru..

Stejně tak díky své světle béžové barvě produkuje pigmenty generované některými bakteriálními kmeny, jako je nazelenalý pigment Pseudomonas aeruginosa, cihlově červený pigment produkovaný Serratia marcescens při pokojové teplotě zlatožlutý pigment Zlatý stafylokok, mezi ostatními.

Kromě toho je to jedno z nejlevněji rostoucích médií na trhu..

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
  • 2 Složení
  • 3 Příprava
  • 4 použití
    • 4.1 Jako základ pro přípravu krevního agaru
    • 4.2 Stimulujte sporulaci bakterií vytvářejících spory
    • 4.3 Údržba kmene
    • 4.4 Počet kolonií
    • 4.5 Provádění diagnostických testů
    • 4.6 Obnova mezofilních aerobů z rekreačních slaných vod (Pláže)
  • 5 Reference

Základ

Jak již bylo uvedeno výše, je to velmi jednoduché médium, které je založeno na poskytování živin pro růst bakterií bez omezení a bez složitých reakcí na interpretaci..

Protože je médium průsvitné, je ideální pro počítání kolonií metodou hloubkového setí..

Složení

Je složen převážně z masového extraktu nebo kvasnicového extraktu, peptonů nebo želatinového pankreatického digestu, agaru-agaru, chloridu sodného a destilované vody..

Masový nebo kvasnicový extrakt a peptony představují základní zdroje uhlíku a minerálů (dusík, fosfor a síra), které bakterie využijí jako zdroj energie a růstové faktory..

Podobně agar-agar je základem všech pevných kultivačních médií, nahrazujících želatinu, což byla první bazická sloučenina, kterou použil Robert Koch k zajištění pevné konzistence svého média..

Agar je polysacharid složený z galaktózy, galaktomananu, agarózy a agaropektinu. Nastaví se na 40 ° C a taje téměř na 100 ° C.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmolaritu nezbytnou pro vývoj bakterií.

Nakonec voda slouží k hydrataci a rozpuštění lyofilizovaných sloučenin. Měla by se použít destilovaná voda upravená na neutrální pH. Voda z vodovodu by se neměla používat, protože obsahuje vápník a hořčík, které mohou reagovat s fosfáty v médiu a tvořit nerozpustné soli..

Příprava

Na jeden litr živného agaru se musí zvážit 31 g dehydratovaného média. Vloží se do baňky a rozpustí se v litru destilované vody. Po 5 minutách stání zahřejte na zdroji tepla a neustále míchejte až do varu po dobu 1 nebo 2 minut..

Příprava kultivačního média.

Baňka se poté umístí do autoklávu a sterilizuje se při teplotě 121 ° C po dobu 20 minut..

Sterilizace v autoklávu

Na konci času se vyjme z autoklávu a servíruje se ve sterilních Petriho miskách za použití digestoře s laminárním prouděním nebo Bunsenova hořáku..

Pokud jsou Petriho misky jednorázové (plastové), musí být médium rozloženo, když má agar teplotu přibližně 50 ° C, aby se zabránilo jejich deformaci nadměrným teplem.

Nechejte ztuhnout a uložte na převrácený držák talíře a až do použití nechejte v chladničce při 2-8 ° C.

Desky musí být před naočkováním temperovány. Destičky s živným agarem by se neměly používat, pokud jsou znečištěné nebo dehydratované.

PH připraveného média musí být upraveno na 7,3 ± 0,2.

Aplikace

Je to nejjednodušší kultivační médium používané v mikrobiologické laboratoři. Jeho složení je vynikající pro růst nenáročných bakterií.

Jeho hlavní použití je vysvětleno níže:

Jako základ pro přípravu krevního agaru

Toto médium se někdy používá jako základna pro přípravu krevního agaru, není však nejčastěji používanou základnou..

Stimulujte sporulaci bakterií vytvářejících spory

Toto kultivační médium je zvláště užitečné pro stimulaci sporulace bakterií vytvářejících spory, jako jsou Bacillus sp.

K tomu kmen rodu Bacil a inkubovány po dobu 24 hodin při 37 ° C v aerobióze. Jakmile kolonie vyrostou, deska se vystaví teplotnímu stresu, to znamená, že se teplota pece zvýší na 44 ° C a ponechá se dalších 24 hodin nebo se umístí na 24 hodin do chladničky.

Na konci času se vyrobí nátěry kultury a obarví se Gramovým barvením nebo sporovým barvením Shaeffer-Fulton. U nich budou pozorovány bacily s endospórami (spory uvnitř bacilu) a exospory (spory mimo bacily)..

Údržba kmene

Některé výzkumné laboratoře nebo laboratoře na podporu výuky na univerzitách vyžadují udržování životaschopných bakterií klinického významu co nejdéle, aby bylo možné použít bakteriální banku (bakterioteca) pro výzkumné práce nebo pro přípravu výukových postupů, kde se studenti naučí manipulovat a identifikovat tyto mikroorganismy.

K tomuto účelu lze použít agar s živinami i infuzní agar s mozkovým srdcem. Připraví se agar, nalije se do zkumavek s bakelitovým víkem a nakloní se na základnu tak, že agar ztuhne a vytvoří na dně blok a na povrchu zkosení (zobák)..

Každá zkumavka je označena názvem bakterie, která má být naočkována, a datem. Každá z bakterií bude naočkována na lunetu a inkubována po dobu 24 hodin, jakmile kolonie vyrostou, zkumavky se skladují při pokojové teplotě.

Bakterioteka musí být obnovena od 1 do 3 měsíců, aby se zabránilo kontaminaci a dehydrataci média a také smrti bakterií.

Tímto způsobem lze udržovat pouze nenáročné bakterie.

Počet kolonií

Ačkoli existují specializované prostředky pro počítání kolonií, jako je standardní agar pro počítání, lze pro tento účel použít výživný agar, a to buď povrchovým setím pomocí drigalského špachtle nebo hloubkou. Z tohoto důvodu je velmi užitečný při mikrobiologické analýze potravin a vody..

Spouštění diagnostických testů

Protože se jedná o médium, které neobsahuje krev ani jiné přísady, je ideální pro odběr kolonií vypěstovaných na tomto médiu k provedení katalázového testu..

Podobně je vzhledem ke své barvě světla indikováno provádět oxidázové testy přímo na ploše naočkovaného agaru bez rušení..

Obnova mezofilních aerobů z rekreačních slaných vod (pláže)

Živný agar připravený s 10% mořské vody je vhodný pro hodnocení mezofilních aerobů ve vodách pláže..

Tímto způsobem lze ocenit skutečnou úroveň kontaminace, kterou mají vody těmito mikroorganismy, protože u tohoto typu vzorků se výsledky překrývají, pokud se použijí kultivační média připravená konvenčním způsobem..

To prokázali Cortez et al. v roce 2013 ve výzkumné práci.

To lze vysvětlit kvůli náhlé změně, kterou bakterie procházejí při přechodu z hypersoleného prostředí do prostředí s nízkým obsahem solí, proto mikroorganismy vstupují do stavu letargie, ve kterém jsou životaschopné, ale ne kultivovatelné..

Reference

  1. „Výživný agar.“ Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. září 2016, 20:33 UTC. 29. prosince 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Redakční Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vliv kultivačních médií připravených s mořskou vodou na zdravotní ukazatele v mořských vodách lázní v Chichiriviche, stát Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M a Cardoso M. Mikrobiologická kvalita vody pro inseminační dávky, pro prasata.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. Publikační služba UCA.

Zatím žádné komentáře