Thayer Martinův agarový základ, příprava a použití

4540
Robert Johnston

The Thayer Martinův agar je vysoce výživné a selektivní pevné médium pro izolaci Neisseria meningitidis a Neisseria gonorrhoeae; oba známé jako patogenní nebo klinicky významné Neisserias.

Jednou z nejdůležitějších zvláštních vlastností Thayer Martin Agar je vysoký obsah doplňků výživy. Tato vlastnost je zásadní, protože Neisserias jsou z hlediska výživy velmi náročné mikroorganismy, a proto nerostou v běžných médiích..

Obchodní médium Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Zdrojový obrázek 1: Pořízeno autorem MSc. Marielsa Gil, obrázek 2. Pixinio.com bakteriologicky zbarvené, upravené, Thayer, Martin, agar.

Na druhou stranu, protože se tyto mikroorganismy běžně vyskytují v nesterilních oblastech, je nutné přidat inhibitory, které zabraňují růstu doprovodné flóry, aniž by to ovlivnilo vývoj rodu Neisseria.

Tento agar se skládá z agaru na bázi GC, hemoglobinu, dalších doplňků výživy a komplexu inhibičních látek (antibiotika a antimykotika). Obchodní domy prodávají každý z doplňků samostatně.

Vzorek, který se má zasít na toto médium, bude záviset na hledaném mikroorganismu. V následujících situacích Neisseria gonorrhoeae ideální vzorky jsou vaginální a uretrální sekrece. Zatímco pro Neisseria meningitidis nejpoužívanějšími vzorky jsou CSF, faryngeální a nasofaryngeální exsudáty.

Rejstřík článků

  • 1 Odůvodnění
    • 1,1 GC základní agar
    • 1,2 Hemoglobin
    • 1.3 Doplněk k obohacení
    • 1.4 Inhibitory
  • 2 Příprava
    • 2.1 Originální agar Thayer Martin
    • 2.2 Upravený agar Thayer Martin
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Reference

Základ

Neisserias jsou mikroorganismy klasifikované jako otravné, a proto je jejich izolace obtížná. Z tohoto důvodu je Thayer Martín komplexním médiem a každá z jeho složek plní funkci, která je vysvětlena níže:

GC základní agar

GC agar obsahuje proteosový pepton, kukuřičný škrob, chlorid sodný, fosforečnan draselný, fosforečnan draselný a agar-agar. Jeho složky poskytují základní živiny pro mikrobiální vývoj, neutralizují toxické mastné kyseliny, pomáhají udržovat osmotickou rovnováhu, definují pH a poskytují médiu pevnou konzistenci..

Hemoglobin

Hemoglobin poskytuje faktory V a X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD a hemin). Z tohoto důvodu v tomto médiu rostou také druhy Haemophilus. Hemoglobin lze komerčně získat v dehydratované formě nebo do média přidat čerstvou defibrinovanou hovězí krev..

Doplněk obohacení

Na druhé straně je třeba do média Thayer-Martin přidat také obohacující doplněk, protože živiny obsažené v základním agaru nejsou dostatečné pro požadavky rodu Neisseria..

Nejčastěji používaný doplněk obohacení se nazývá isovitalex. Obsahuje glutamin, adenin, NAD, kokarboxylázu, guanin, dusičnan železitý, kyselinu p-amino-benzoovou, vitamin B12, thiamin a glukózu. Všechny tyto sloučeniny jsou nezbytné pro správný vývoj patogenních Neisserias.

Inhibitory

Jelikož se jedná o vysoce výživné médium, musí být použity inhibitory, které zabraňují růstu mikroorganismů obvyklé flóry oblasti a tím podporují izolaci rodu Neisseria..

Komplex inhibitorů je složen z vankomycinu, kolistinu a nystatinu. Vankomycin inhibuje růst grampozitivních bakterií, kolistin zabraňuje růstu gramnegativních bakterií, jako jsou Pseudomonas a některé saprofytické Neisserias, a nystatin působí na kvasinky jako Candida albicans.

Nicméně, Thayer Martin Agar byl později upraven; změny spočívaly v přidání trimethoprimu, zvýšení množství agaru a přidání další glukózy. Tyto změny významně zlepšily obnovu druhu Neisseria gonorrhoeae.

Je třeba poznamenat, že trimethoprim inhibuje růst rodu Proteus a jeho následnou tvorbu rojení. V tomto smyslu jsou antibiotika ta, která dávají médiu Thayer Martin selektivní charakter.

Příprava

Originální agar Thayer Martin

-GC agar

Naváží se 8,2 g dehydratovaného GC média a suspenduje se ve 100 ml. Promíchejte a vařte po dobu 1 minuty za častého míchání, aby se úplně rozpustil. Směs se sterilizuje v autoklávu po dobu 15 minut při teplotě 121 ° C.

-2% hemoglobinu

Suspendujte 2 g dehydratovaného hemoglobinu ve 2 nebo 3 ml horké destilované vody, dokud nevznikne jednotná směs. Postupně přidávejte více vody, abyste dosáhli objemu 100 ml. Před sterilizací musí být suspenze homogenní.

Sterilizujte v autoklávu po dobu 15 minut.

-Doplněk obohacení

Rekonstituujte komerční lahvičku s ředidlem poskytnutým stejnou obchodní společností. Dobře promíchejte. Množství použitého ředidla bude specifikováno v pokynech k soupravě..

-Doplněk inhibice V.C.N (vankomycin, kolistin, nystatin)

Rekonstituujte lahvičku s ředidlem poskytnutým obchodní společností. Dobře promíchejte. Množství použitého ředidla bude specifikováno v pokynech k soupravě..

-Připravený

Na každých 100 ml agaru GC postupujte následovně:

Když GC agar opustí autokláv, nechte jej vychladnout na teplotu přibližně 50 ° C a přidejte 2 ml připraveného roztoku hemoglobinu, 2 ml obohaceného doplňku (isobitalex nebo britalex) a 2 ml inhibičního doplňku. Smíchejte a podávejte ve sterilních Petriho miskách..

Nechejte ztuhnout a až do použití uložte do chladničky.

Barva připraveného média je třešňově červená. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2

Upravený agar Thayer Martin

Naváží se 8,2 g dehydratovaného GC média a suspenduje se ve 100 ml. Přidejte 1 g agaru a agaru a přidejte 0,3 g glukózy. Promíchejte a vařte po dobu 1 minuty za častého míchání, aby se úplně rozpustil. Směs se sterilizuje v autoklávu po dobu 15 minut při teplotě 121 ° C.

Připravte hemoglobin a doplněk obohacení, jak je popsáno výše.

Použitým doplňkem inhibice je V.C.N.T (vankomycin, kolistin, nystatin, trimethoprim).

-Připravený

Postupujte, jak je popsáno u původního agaru Thayer Martin.

Použití

Thayer Martin Agar by měl být před zahřátím vzorků ponechán zahřát. Běžně používané vzorky jsou výtěry z hltanu, výtěry z nosu, vaginální, uretrální a / nebo rektální výtok a CSF..

Použijte čerstvé vzorky a na agaru připravte silná inokula. Vzorky se vysévají přímo vypouštěním materiálu a poté pruhem vyčerpání na povrchu.

Destičky se inkubují při 35-37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v mikroaerofilní nádobě (5% COdva). Na konci inkubační doby se plotny vyšetřují na malé kolonie, šedé barvy a někdy mukoidního vzhledu..

Proveďte Gramovy a potvrzující biochemické testy na podezřelých koloniích.

QA

Následující mikrobiální kmeny lze použít k provedení kontroly kvality na agaru Thayer Martin.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 a Neisseria meningitidis ATCC 13090; u obou kmenů se očekává uspokojivý vývoj.

Měly by být zahrnuty také následující kmeny: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 a Candida albicans ATCC 10231. U všech z nich se v tomto médiu očekává úplná nebo částečná inhibice..

Omezení

-Je třeba mít na paměti, že v médiu mohou růst bakterie, které jsou rezistentní vůči použitým inhibitorům.

-Existují kmeny Neisseria gonorrhoeae které mohou být citlivé na použitou koncentraci vankomycinu. Z tohoto důvodu se doporučuje používat čokoládový agar doplněný isovitalexem, ale bez inhibitorů..

-Existují kmeny kvasinek rezistentních na nystatin, které mohou růst v tomto médiu a interferovat s izolací patogenních Neisserias, zejména gonokoků..

Reference

  1. Diagnostické laboratoře Valtek. Thayer-Martinův agar.2016. Dostupné na: com
  2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium Modified. 2010. Dostupné na: britanialab.com
  3. Přispěvatelé z Wikipedie. Thayer-Martinův agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. října 2017, 16:33 UTC. K dispozici na: wikipedia.org 4. Zpřístupněno 28. února 2019.
  4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010. Dostupné na: britanialab.com.
  5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment for Fastidious Microorganisms. 1999. Dostupné na: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.

Zatím žádné komentáře