Technická a důležitá izolace mikroorganismů

The izolace mikroorganismů zahrnuje soubor technik používaných k extrakci a oddělení sledovaných druhů mikrobů z jejich přirozeného prostředí na stanoviště in vitro. Tyto techniky jsou souborem mnoha základních a nezbytných nástrojů pro mikrobiologické studie..

Většina mikroorganismů, které jsou známé a které byly definovány vědou, jsou ty, které lze izolovat a uchovávat v nádobách, které částečně simulují vnitřní podmínky míst, kde žijí..

Snad jedním z prvních mužů, kteří praktikovali izolaci mikroorganismů, byl Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723), který sbíral a izoloval vzorky mikrobů z velkého počtu míst a ekosystémů, aby je mohl pečlivě sledovat pod stovkami mikroskopů, které navrhl..

Avšak až v dobách vědců Louise Pasteura a Roberta Kocha se v průběhu 19. století začaly provádět přísné postupy, které sloužily k izolaci konkrétních mikroorganismů, a to vše proto, aby je bylo možné studovat v detail..

Na rozdíl od Leeuwenhoeka se tito vědci zaměřili na izolaci definovaných druhů od ostatních druhů mikrobů v prostředí. Kromě toho měli zájem udržet je naživu co nejdéle mimo jejich přirozené prostředí..

V současné době byly vyvinuty přesné techniky pro izolaci a růst mnoha různých mikroorganismů získaných z téměř jakéhokoli prostředí v biosféře..

Rejstřík článků

• 1 Techniky pro izolaci mikroorganismů
  • 1.1 Škrábance nebo škrábance
  • 1.2 Fúze s médiem nebo povlakem
  • 1.3 Sériová ředění
  • 1.4 Postup obohacování
  • 1.5 Unikátní nebo exkluzivní technika
  • 1.6 Vlastní techniky
• 2 Důležitost
• 3 Odkazy

Techniky izolace mikroorganismů

Všechny izolace mikroorganismů začínají odběrem vzorku ve volné přírodě, kde se nacházejí zájmové mikroorganismy. Těmito místy mohou být rány ve zvířecích nebo rostlinných tkáních, půdě nebo substrátech, kalužích, mořích, površích, jako je kůže atd..

Odběr vzorků se provádí dotykem nebo podepřením nádoby, která má médium s příslušnými požadavky na růst mikroorganismů na povrchu, ze kterého je žádoucí izolovat. V tomto kontejneru získáte takzvanou „kulturu“ mikrobů..

Obecně platí, že první plodinou získanou z přírodních stanovišť je nepochybně „smíšená plodina“, to znamená, že se skládá z velkého počtu různých druhů mikrobů..

Většina druhů mikroorganismů však může být od sebe izolována v laboratoři při hledání kultur mikroorganismů, kde rostou pouze druhy, které jsou předmětem zájmu, nebo jinými slovy získání „čistých kultur“.

V podstatě je proces, který se provádí za účelem získání „čistých kultur“, známý jako „izolace mikroorganismů“.

Existuje velké množství technik pro izolaci mikroorganismů a dokonce existují i ​​některé specifické pro určitý typ mikroorganismů. V ostatních případech je možné získat čistou kulturu pouze odběrem vzorku z přírodního prostředí..

Mezi izolační techniky, které se nejčastěji používají k oddělení sledovaných druhů nalezených ve směsných kultivačních médiích, patří:

Škrábance nebo pruhy

Možná je to nejpoužívanější metoda izolace mikroorganismů. Tato technika spočívá v přípravě sterilního pevného média se všemi nutričními sloučeninami nezbytnými pro růst mikroorganismu ve skleněné nádobě, jako je Petriho miska..

Za použití jemného, ​​obecně špičatého nástroje se dotýká mikroorganismu, který se má izolovat ve smíšené kultuře, a poté se ve sterilním pevném médiu začne špička nástroje, kterým se dotýkal mikroorganismu, posouvat ze strany na stranu po celé poznávací značka.

Děje se to intenzivně tam a zpět po povrchu pevného nebo agarizovaného média, jako by to bylo cik-cak. To se obvykle provádí, dokud není pokryta přibližně jedna třetina průměru agaru na misce..

Fúze s médiem nebo povlakem

U této metody se ředění média, kde žijí sebrané mikroby, provádí do bodu, kdy na každý mililiter média, kde byly naředěny, zbývá jen několik set buněk..

Z tohoto ředění se odebere několik mililitrů a smíchá se s médiem, které se přidá do nádoby před ztuhnutím. Když se vytvoří směs mezi agarizovaným médiem a kapalným médiem, kde jsou mikroorganismy, zůstanou ponořeny do média a jsou viditelné pouze do doby, než se množí ve formě kolonie..

Protože se vyvíjejí jako kolonie, je snazší je oddělit od zbytku mikroorganismů jinými metodami, například škrábáním..

Sériová ředění

Tato metoda spočívá v sériovém ředění média, ve kterém se mikroorganismy nacházejí. Příkladem toho jsou ředění, která se provádějí k čištění Lactococcus lactis nebo Lactobacillus acidophilus, bakterie odpovědné za výrobu sýrů a jogurtů.

Přibližně 1 mililitr se odebere ze zkumavky obsahující kyselé mléko nebo předem fermentovaný jogurt a tento mililiter se naočkuje do sterilního mléka bez mikroorganismů. Později se odebere přibližně jeden mililitr uvedeného mléka a postup se opakuje.

To se opakuje přibližně třikrát nebo čtyřikrát za sebou, což je velmi pravděpodobné získat Lactococcus lactis nebo Lactobacillus acidophilus v médiu izolovaném od kontaminantů, které mohou představovat jiné mikroby.

Postup obohacování

Této metodologie je dosaženo pěstováním mikroorganismů v kultivačním médiu za podmínek, které stimulují nebo usnadňují růst sledovaných druhů, a v mnoha případech za podmínek, které inhibují růst dalších kontaminujících mikroorganismů..

Bakterie rodu Salmonella Rostou v kultivačním médiu obohaceném selenitem, protože tyto mikroorganismy transformují selenit na selen, aby jej metabolizovaly. Selenit v médiu ztěžuje asimilaci živin pro jiné mikroorganismy než salmonel..

Unikátní nebo exkluzivní technika

Možná jde o nejobtížnější a nejméně účinnou techniku ​​izolace mikrobů. Zahrnuje to umístění kapky média (vzorku), kde jsou mikroorganismy uloženy na sterilní krycí sklíčko, a následné umístění na mikroskopický stolek..

Později se při pozorování odstraní jedna buňka pomocí sterilní mikropipety. Kapka se umístí na další sterilní krycí sklíčko, které se inkubuje při vhodné teplotě pro mikroorganismus. Nakonec se pod mikroskopem znovu pozoruje růst.

Pokud se z jedné buňky odebrané při opětovném pozorování vyvinuly nové buňky, přidají se do sterilního kultivačního média, aby se získala plně izolovaná čistá kultura..

Vlastní techniky

Na planetě Zemi existuje nespočet různých mikrobů, které jsou rozptýleny téměř v každém známém ekosystému. Některé mikroorganismy jsou známé jako extremofily a pro svůj vývoj a růst vyžadují jedinečné podmínky..

Tyto extrémní podmínky jsou pro izolaci výhodné i nevýhodné, protože i když umožňují pouze růst těchto mikroorganismů, může být obtížné je znovu vytvořit in vitro.

Důležitost

Izolace mikroorganismů představovala jeden z nejdůležitějších pokroků v oblasti vědy a medicíny. To umožnilo lidstvu studovat a vyvinout účinnou léčbu proti různým mikrobiálním patogenům..

V současné době je jistě známo, že mikroorganismy tvoří podstatnou součást všech ekosystémů, takže dosažení izolace některých z nich s relativním významem pro člověka umožňuje výzkumníkům intenzivně je studovat, aby bylo možné do hloubky pochopit jejich úlohu v každém ekosystému..

Reference

1. De Kruif, P. (1996). Lovci mikrobů. Houghton Mifflin Harcourt.
2. López, M. J., Nichols, N. N., Dien, B. S., Moreno, J., & Bothast, R. J. (2004). Izolace mikroorganismů pro biologickou detoxikaci lignocelulózových hydrolyzátů. Aplikovaná mikrobiologie a biotechnologie, 64(1), 125-131.
3. Spigno, G., Tramelli, L., Galli, R., Pagella, C., & De Faveri, D. M. (2005). Biofiltrace par dichlormethanu: izolace mikroorganismů.
4. Tresner, H. D. a Hayes, J. A. (1970). Vylepšená metodika pro izolaci půdních mikroorganismů. Appl. Environ. Microbiol., 19(1), 186-187.
5. Willey, J. M., Sherwood, L., & Woolverton, C. J. (2009). Prescottovy principy mikrobiologie. Boston (MA): McGraw-Hill Higher Education.