The orcein je přírodní fialová barva extrahovaná z různých lišejníků, jako jsou: orchilla nebo urchilla, lichen fruticoso, Rocella tinctoria Y Lecanora parella hlavně. The Rocella tinctoria Nachází se na africkém a americkém kontinentu, i když jej lze nahradit jinými druhy v Evropě.
Tato skvrna byla široce používána v cytogenetických studiích od starověku. V tomto smyslu byl přípravek orcein, který obsahuje kyselinu octovou, představen společností LaCourt v roce 1941, a proto byl původně nazýván technikou LaCourt..
Podobně se díky své jednoduchosti a nízké ceně používá k výrobě lakmusu (barvivo extrahované z lišejníků) a v histologických studiích (barvení buněk a tkání)..
Několik studií použilo toto barvení v kombinaci s jinými chemikáliemi, jako je například mikrokarminát amoniaku a kyselina octová, k barvení elastických vláken a chromozomů. V současné době se orcein nadále používá v cytogenetických studiích zvířat a rostlin..
Nedávno Silva a kol. 2017 úspěšně použil tuto skvrnu k pozorování různých změn, ke kterým dochází u elastických vláken kůže palce u chilských starších dospělých. Tato studie odhalila, jak se vlákna palce mění se stárnutím.
V tomto smyslu byla u jedinců starších 80 let pozorována hnědočerná barva elastických vláken; zatímco u nejmladších (od 60 let) jsou považováni za červenohnědou barvu. Cytoplazma a další buněčné struktury se zbarví do žlutozelené barvy.
To umožnilo potvrdit přítomnost a stav elastických vláken z hlediska jejich dispozice, množství a integrity. Na druhou stranu bylo také zdůrazněno, že orcein je velmi užitečný pro identifikaci aneuryzmat a diagnostiku arteritidy, kromě jiných stavů.
Rejstřík článků
Orcein je součástí oxazinové skupiny barviv a barvení je založeno na jeho afinitě k DNA. Barvivo se váže na negativní náboj této molekuly, představovaný fosfátovou skupinou. Proto jsou chromozomy obarveny fialově.
Zbytek buněčných struktur však získává jinou barvu. Konkrétně v případě elastických vláken jsou barevná červenohnědá, buněčná jádra od modré po tmavě fialovou, zatímco kolagen nezbarví.
Z tohoto důvodu se orcein používá k barvení chromatinu a diferenciaci pohlaví u některých druhů much. Podobně mohou být obarvena jádra a některé jaterní inkluze produkované antigeny hepatitidy B..
Roztoky orceinu mají specifické funkce při barvení. Orcein A má funkci změkčování buněčných membrán, způsobuje jejich smrt a paralyzuje proces jejich dělení. Mezitím má orcein B na starosti dokončení zbarvení adhezí na chromozomy..
K přípravě 1% roztoku acetoorceinu se 2 gramy orceinu rozpustí ve 45 ml ledové kyseliny octové, výhodně horké, a při teplotě místnosti se přidá 55 ml destilované vody..
Poté se neustále míchá, aby se roztok homogenizoval, aby se později nechal odpočívat, dokud nevychladne. Nakonec se skladuje při 4 ° C v tmavých lahvích. Tento přípravek použil Flores 2012 ke sledování fází zrání kravských oocytů..
V tomto případě se například roztok aceto-orceinu umístí na tkáň předem fixovanou v kyselině octové-ethanolu po dobu 24 hodin. Tento proces barvení se provádí po dobu 30 minut a tkáň se následně odbarví..
Podobně jej lze použít při identifikaci organel v mnohobuněčných tkáních. V tomto případě je skvrna bukální sliznice obarvena kapkou roztoku aceto-orceinu, krycí sklíčko je umístěno na sklíčko a okamžitě lze pozorovat jádro buňky s jejími podstrukturami.
Kromě toho lze orcein připravit s dalšími chemikáliemi, jako je kyselina mléčná a kyselina propionová. K tomu se jeden gram orceinu rozpustí v předem smíchaném roztoku při teplotě místnosti 23 ml kyseliny mléčné a 23 ml kyseliny propionové; objem se doplní destilovanou vodou do 100 ml.
S tímto laktopropionovým roztokem orceinu je možné pozorovat různé fáze meiotického dělení rostlinných buněk. V tomto případě se předem fixovaný a hydrolyzovaný vzorek umístí na 15 minut do roztoku lakto-propionové orceiny a poté se tkáň rozetře na podložní sklíčka..
Ve studii Duque z roku 2016 o polyethylenových chromozomech použil přípravek 2 gramy orceinu zředěného v kyselině octové a 85% kyselině mléčné a zředěný 65% roztokem kyseliny octové. Nakonec se podíval na chromozomy ve slinných žlázách Drosophila melanogaster.
Je důležité si uvědomit, že v závislosti na vzorku a na tom, co má být hodnoceno, je připraven vhodný roztok orceinu. Například k roztoku orceinu A se přidá 1N kyselina chlorovodíková, aby se pozorovaly dělící se buňky..
Zatímco se roztok orceinu B rozpustí ve 45% kyselině octové. Tato technika je zkrácenou metodou barvení a obecně se používá jako doplněk barvení chromozomálních struktur..
Od minulých staletí můžete v zemích amerického kontinentu, jako je Argentina, získat lišejníky, jako jsou: Lecanora, Parmelia Y Deštník, což jsou skvělé zdroje orceinu. Také evropské oblasti, jako jsou Kanárské ostrovy, byly v té době velkými producenty orchilly.
To bylo exportováno do dalších měst na stejném kontinentu, jako je Janov a do zemí, jako je Anglie, zatímco Holland monopolizoval výrobu lakmusu z orchily. Takže později byl tento lišejník redukován, dokud nezanikl.
To vedlo k nahrazení orchilly jinými rostlinami s vlastnostmi barviv. Vznik syntetických barviv však přispěl k ukončení obchodu s tímto lišejníkovým zdrojem orceinu..
To bylo možné díky Cocqovi, který v roce 1812 popsal syntézu orceinu, protože věděl, že je syntetizován fenolickou sloučeninou zvanou orcinol. Navzdory tomu je v současné době stále preferovaný přírodní orcein.
Může to být proto, že orcinol je velmi silně zapáchající sloučenina, jejíž dlouhodobá expozice může nést zdravotní rizika, jako je ztráta schopnosti detekovat pachy. Tato poškození hypofýzy by mohla jít z dočasného na trvalé, čím větší je expozice..
Zatím žádné komentáře