The příprava kultivačních médií jedná se o rutinní metodiku používanou v laboratořích pro růst požadovaných mikroorganismů. Kultivační média jsou pevné, kapalné nebo polotuhé přípravky, které mají všechny potřebné živiny pro vývoj mikrobiální populace..
Obecně jsou prostředky pro kultivaci mikroorganismů bohaté na bílkoviny a aminokyseliny a obvykle obsahují nějakou složku, která podporuje růst sledovaného organismu, jako jsou například vitamíny, krev, sérum..
Neexistuje žádné obecné nebo univerzální kultivační médium, protože jeho složení se liší v závislosti na potřebách sledovaného mikroorganismu. Některé bakterie mohou růst v jakémkoli kultivačním médiu, jiné však mají zvláštní požadavky..
Rejstřík článků
Mikroorganismy, jako jsou houby a bakterie, nelze kvůli jejich malé velikosti jednotlivě studovat. Z tohoto důvodu musí být pěstovány umělými prostředky, které umožňují výrazný nárůst populace..
Například pokud chceme studovat bakterie, musíme jim zajistit správné podmínky, aby se mohly množit a tvořit kolonii (kterou lze pozorovat pouhým okem)..
Příprava kultivačního média se velmi liší v závislosti na typu mikroorganismu, který je žádoucí kultivovat. Před jeho přípravou je nutné znát základní výživové potřeby pracovního organismu.
Nejběžnější komponenty používané v kultivačních médiích budou popsány níže, aby bylo možné získat obecnou představu o jejich přípravě:
Používá se v kulturách jako gelující činidlo a přidává se při hledání pevného nebo polotuhého média. Prvním tuhnoucím činidlem používaným při přípravě média byla želatina, ale v roce 1883 byl do světa bakteriologie zaveden agar W. Hesse.
Bakteriologický agar má jako hlavní složku polysacharid se složitými větvemi extrahovanými z řas. Tato sloučenina se používá jako zahušťovadlo v běžných potravinách, jako je zmrzlina a džemy..
Je to velmi cenný prvek v mikrobiologii z několika důvodů. Hlavně proto, že jej mikroorganismy nemohou degradovat, zkapalňuje se při teplotě 100 ° C a zůstává v kapalném stavu, dokud nedosáhne přibližně 45 ° C nebo méně.
Pokud chcete připravit pevné médium, měla by být koncentrace agaru asi 1,5%, zatímco polotuhé látky by měly být připraveny od 0,3 do 0,5%..
Pěstování patogenních organismů vyžaduje tělní tekutiny, aby se mohly vyvíjet tak, jak by se vyvíjely ve svém přirozeném prostředí. Z tohoto důvodu se přidává celá nebo defibrilovaná krev. Tekutina se extrahuje ze zdravého zvířete a po sterilizaci se přidá do kultivačního média.
Získávají se z různých částí zvířat (jako je maso nebo játra) nebo ze zeleniny (semena) a zpracovávají se za účelem získání pevného koncentrátu ve formě pasty nebo prášku. Nejběžnější jsou kvasnice, slad a maso.
Tyto organické sloučeniny se získávají enzymatickou nebo chemickou hydrolýzou živočišných nebo rostlinných tkání. Účelem je přidat obsah bohatý na aminokyseliny, které jsou základními jednotkami bílkovin..
Pufry nebo pufrovací systémy zabraňují náhlým změnám pH a pomáhají udržovat optimální rozmezí, které tělo toleruje..
Většina organismů může dobře prospívat při pH 7, ačkoli některé bakterie preferují alkalická média. Existují však bakterie, které odolávají změnám pH mezi hodnotami 6 a 9.
U druhů citlivých na pH není poškození způsobeno nadměrným množstvím vodíkových nebo hydroxylových iontů, ale nárůstem slabých kyselin nebo zásad, které mohou proniknout do buňky.
Podobně indikátory, které přidávají pH, aby bylo možné jej sledovat a vyhnout se odchylkám způsobeným fermentací nebo jinými procesy..
Hlavním cílem při přípravě kultivačního média je přidat všechny nezbytné složky, které umožní izolovat úspěšný vývoj organismu. K dosažení požadovaného média je třeba určit nejúčinnější kombinaci složek a živin..
Příprava i skladování média jsou rozhodující pro zajištění úspěšného růstu, protože složení média a dostupnost živin závisí na těchto krocích..
Je třeba vzít v úvahu, že kultivace mikroorganismů je úkolem, který je ovlivňován několika vnějšími faktory kultivačního média, jako je intenzita přijímaného světla, teplota a úroveň kyselosti nebo zásaditosti média. Každá z těchto proměnných proto musí být vzata v úvahu.
Na základě jejich složení existují tři hlavní typy plodin: přírodní nebo empirické, polosyntetické a definované syntetické nebo chemické látky..
V přírodním prostředí není přesné složení známé. Patří sem přísady, jako je mléko, zředěná krev, zeleninové šťávy, výtažky a nálevy z masa a peptonů. Z ekonomických důvodů se často přidávají levné složky, jako je sójový extrakt, syrovátka, melasa atd..
Nazývá se polosyntetické médium, pokud je jeho složení částečně známé. Každé médium obsahující agar se stává polosyntetickým médiem.
Mezi nimi máme mimo jiné agar s bramborovou dextrózou, agar czapek-dox, ovesný agar, agar s masovým peptonem..
V tomto případě je složení média - pokud jde o množství zdrojů uhlíku, dusíku, síry, fosforu a dalších potřebných růstových faktorů - zcela známé. Je to velmi užitečné, pokud chcete získat reprodukovatelné výsledky pro ostatní výzkumníky.
U takzvaných „mikroorganismů se speciálními růstovými požadavky“ je nutné přidat potřebné komponenty. Příkladem tohoto typu jsou Lactobacillus.
Podobně existuje další klasifikace pro kultivační média založená na typu mikroorganismu, který na něm může růst. Na základě tohoto principu máme následující obecné, obohacovací, selektivní a diferenciální prostředky. Každá z nich je popsána níže:
Ty podporují vývoj široké škály mikroorganismů. Pokud některý organismus potřebuje pro svůj růst zvláštní podmínky, nebude se schopen v tomto typu kultivace úspěšně rozvíjet..
Obohacovací médium podporuje růst určitého typu mikroorganismu, ale nebyla přidána žádná látka, která by zabránila růstu jiných typů mikrobů.
Hledají specifický růst mikroorganismu, mimo jiné jej nazývají houby, bakterie, prvoky. K tomu brání rozvoji ostatních.
K dosažení tohoto cíle lze přidat chemické sloučeniny, které jsou smrtelné pro širokou skupinu mikroorganismů a neškodné pro sledovaný organismus, nebo přidáním zdrojů energie, které lze asimilovat pouze hledaným mikrobem..
Selektivní média se používají při odběru lékařských vzorků za účelem kultivace patogenního mikroorganismu. Zde je nutné podporovat růst patogenu a inhibovat vývoj normální mikrobiální flóry u pacienta.
Například agar na bázi siřičitanu bismutitého neumožňuje růst grampozitivních bakterií a velkého počtu bakterií nalezených v gastrointestinální dutině. Z tohoto důvodu se používá ke kultivaci gramnegativních bakterií, které způsobují tyfus., Salmonella typhi ve vzorcích stolice.
Tento typ využívá některé diagnostické charakteristiky zájmového organismu (například zvláštnosti jeho metabolismu), aby je mohl identifikovat proti jinému druhu, který roste ve stejném prostředí..
Jak diferenciální média, tak selektivní média jsou velmi užitečná v oblasti klinické mikrobiologie a veřejného zdraví, protože tyto disciplíny musí detekovat přítomnost specifických mikroorganismů souvisejících s patologiemi nebo špatnými hygienickými podmínkami..
Do kultury lze přidat indikační látky, které hledané kolonii dodávají charakteristickou charakteristiku. Například laktóza a indikátor pH se přidají k agar-eosin-methylenové modři (zkráceně EMB) a MacConkey agaru..
Když se tedy v těchto médiích vytvoří kolonie se schopností fermentovat laktózu a produkovat aldehydy, lze je pozorovat ve speciální barvě.
V současné době lze kultivační média zakoupit v lyofilizované formě. Příprava je proto jednodušší a zbývá jen rehydratovat produkt. Obsah musí být zvážen (s ohledem na konečné množství, které má být připraveno) a rozpuštěn v destilované vodě podle všech údajů o produktu.
Obsah kapalného média musí být pro následnou sterilizaci rozdělen do požadovaných nádob (Petriho misky, zkumavky atd.). K distribuci pevného média je nutné ho roztavit pomocí mikrovln nebo vystavit materiál vodní lázni. Musí být upraveno pH média.
Agar se obvykle používá ve zkumavkách nebo v Petriho miskách. Pokud agar ztuhne v nakloněné poloze, se správným úhlem, takže konečná koncová hrana je úhlopříčná, je toto uspořádání známé jako zobákový zobák nebo šikmé trubky. Když agar ztuhne ve zcela svislé poloze, nazývá se to „hluboký“..
Po sterilizaci média - pomocí autoklávu - se nechají vychladnout. Musí s nimi být zacházeno v prostředí bez mikroorganismů, nejběžnější je pracovat se zapáleným zapalovačem, který zajišťuje aseptické prostředí v jejich blízkosti..
Zatím žádné komentáře